alexxlab

Содержание

как правильно стирать в стиральной машинке, гелем, жидкостью или порошком

Изначально мембранная одежда придумана была для спортсменов. Но, благодаря своим свойствам не пропускать влагу и хорошо удерживать тепло, она приобрела популярность в повседневной носке. Особенно детские вещи. С ростом популярности таких вещей на рынке появились средства для стирки мембранной одежды. Их огромный выбор может запутать покупателя.

Мембранная одежда помогает любителям активного отдыха оставаться сухими независимо от погодных условий.

Более того, помимо хорошего средства, нужно выбрать правильный режим чистки. Разберем подробно, как и чем можно безопасно постирать мембранную одежду.

  • Средства для стирки мембранной одежды
    • Гели
    • Порошки
    • Шампуни
    • Спрей
  • Чем противопоказано стирать
  • Как правильно ее стирать
    • Руками
    • В стиральной машинке
  • Как сушить мембранную одежду, ухаживать после стирки
  • Видео: как стирать мембранную одежду в стиральной машине

Средства для стирки мембранной одежды

Мембрана – это тонкая пористая прослойка между верхним и нижним слоем ткани в одежде. Именно она отвечает за водонепроницаемость и удержание тепла.

Мембранные куртки сделаны из материалов, которые позволяют пару проходить наружу, но не пропускают капли воды внутрь.

Эти функции выполняются за счет пористой структуры мембраны. Именно поэтому стирать ее обычными порошками нельзя, так как его частицы забивают микропоры, и мембрана быстро приходит в негодность, переставая выполнять свои функции. Поэтому важно подобрать спецсредство, предназначенное для чистки мембранных изделий.

Даже если внешний материал промокнет, внутри мембранного изделия будет сухо.

Важно! Стирать мембранную одежду обычным порошком категорически запрещается.

Специальные средства существуют в разных видах: порошки, спреи, шампуни, гели. Поэтому каждый найдет удобное именно для себя средство. Разберем их особенности, преимущества и недостатки.

Ассортимент очистительных средств позволяет качественно ухаживать за одеждой.

Гели

Гель – одна из самых удобных форм средств для чистки мембран. Он подойдет как для автоматического, так и для ручного режима.

Предпочтительно для стирки мембранной одежды использовать специальные средства.

Лучшие гели от производителей:

  • Denkmit Fresh Sensation. Бюджетный вариант, но отлично зарекомендовал себя в качестве чистящего средства. Единственный минус – отсутствие спец пропитки для восстановления волокон мембраны. Отлично подходит для совместного использования со специальным спреем-пропиткой.
  • Perwoll Sport & Active. Гель для спорт-одежды. Подходит также при чистке обуви. Чтобы применять для мембранных изделий, смотрите специальное указание на этикетке Membrane Function.
  • Burti Sport & Outdoor. Гель-концентрат, содержит фосфонаты, анионные и неионные тензиды, хорошо борется с загрязнениями, сохраняя мембрану. Предназначен для цветного, темного и светлого белья. На упаковке обязательно должно быть указание ” для спортивной одежды”.
  • Гель Unicum для спорт. вещей. Подойдет также для чистки пуховиков и курток. Бережно очищает мембрану, не нанося повреждений. Не содержит фосфатов. Предназначен для ручного способа.
Гели универсальны для большинства материалов спортивной и аутдор-одежды.

Гели в основном имеют высокую концентрацию чистящего вещества. Во время их применения нужно четко соблюдать дозировку, указанную на упаковке. В противном случае могут забиться поры мембраны.

Порошки

Порошок имеет в составе чистящее вещество крупной фракции. Даже растворяясь в воде оно проникает в поры мембраны, забивая ее. Поэтому средства для стирки мембранной одежды выпускается только в форме геля и жидкостей, содержащие специальные очищающие элементы.

Мембранную одежду можно стирать несколькими способами.

Если под рукой не оказалось специального средства, не применяйте обычный стиральный порошок, а воспользуйтесь следующим лайфхаком.

На заметку! Хозяйственное мыло отлично подойдет для стирки мембранной одежды.

Температура воды при стирке этого материала не должна превышать 40 градусов.

Возьмите крупную терку, натрите хозяйственное мыло. Добавьте воды, и тщательно размешайте до состояния геля или жидкости. Полученное средство добавляется в барабан стиральной машины, специальный отсек для жидкого моющего средства, или в таз при ручной стирке. Количество моющего вещества зависит от объема вещей.

Шампуни

Такая форма выпуска наиболее популярная. Шампунь можно добавлять в отсек для жидких порошков или специальную емкость, которая затем помещается в барабан.

Машинная чистка мембраны будет безопасной, если соблюдать рекомендации.

Лучшие производители шампуней:

  1. NIKWAX.
  2. Nordland.
  3. Henkel.
  4. Upeco.
  5. Domal.
  6. HEITMANN.

Среди них вы найдете дорогостоящие шампуни, использующиеся при стирке мембранной одежды для охоты, рыбалки, спорта. Также производители имеют более дешевые линейки для чистки повседневных мембранных изделий, которые имеют более простую структуру, нежели специальные спортивные.

Лучшие шампуни:

  • Sport Fein Fashion от DOMAL. Содержит неионные и анионные ПАВ, в качестве дополнительного компонента – пшеничный протеин. Благодаря этому данная жидкость бережно очищает одежду от загрязнений и восстанавливает мембрану.
  • Tech Wash от Nikwax. Специальное средств, предназначено для чистки только мембраны, не подходит для пуховиков и курток. Представляет собой 30 процентный раствор калийного мыла в воде.
  • Washbalsam. Содержит анионные и неионные ПАВ, а также пятипроцентный раствор калийного мыла и энзимы. Подходит для спортивной обуви, одежды, а также термобелья и пуховиков.
  • Activ & Fresh от Ласки. Henkel хорошо зарекомендовал себя в мире чистящих средств для одежды. Актив фреш бережно очищает спортивные вещи, а также мембранные компоненты, сохраняя их функции. Содержит фосфонаты.
  • SALTON sport. Содержит натрия хлорид и гидроксид, динатриевую соль, ПАВ. Предназначен для климатических вещей с мембраной, в основном – теплых комбинезонов и термобелья.
  • Spezial wacche. Предназначен для стирки верхней одежды.
    Подходит для цветных и черных вещей. Бережно удаляет загрязнения и сохраняет яркость цвета.
Сегодня существует большое количество средств для мембранных тканей.

Выбор жидких средств очень большой. Лучше приобретать те, что не содержат фосфатных или натриевых солей, а также с добавлением специальной пропитки, которая способствует восстановлению мембраны.

Спрей

Для стирки специально разработаны жидкие средства: гели и шампуни. Спреи не помогут полноценно удалить загрязнения, но способны освежить внешний вид и избавиться от неприятных запахов. Это своеобразная реанимация в случае, когда нет возможности скорой стирки.

Для чистки одежды из мембранных тканей используйте специальные чехлы.

Важно! Спреи не подходят для полноценной стирки.

Также существуют спреи для, которые поддерживают выполнение функций мембраны: влагоотталкивающие и аккумулирующие тепло. Ими обрабатывают вещь, чтобы продлить срок ее службы.

Мембранная ткань требует особого подхода при стирке.

Также их используют в комбинации с шампунями и гелями, не имеющих в составе специальных компонентов, которые пропитывают мембрану, сохраняя и восстанавливая ее волокна.

Пропитывающие спреи для поверхностной обработки мембранной одежды:

  • Grangers Clothing Repel.
  • Nikwax TX. Direct Spray-on.
  • Grangers Performance Repel Spray.
  • Toko Eco Textile Proof.
Мембранная одежда не пропускает влагу.

Ими обрабатывают только наружную часть вещи, не прилегающую к коже. Использовать только на чистой вещи. Если в средстве для стирки уже содержится пропитка, необходимости в дополнительном приобретении спрея нет.

Покупайте качественные средства для очистки одежды.

Также в продаже есть освежающий спрей Odour Eliminator от Grangers, предназначенный для удаления неприятных запахов со спортивной одежды и обуви. Борется только с запахами, не содержит очищающих элементов!

Чем противопоказано стирать

Мы уже говорили, что мембрану нельзя стирать обычным порошком. Также есть еще несколько средств, которые нельзя использовать для стирки мембранной одежды:

  • Хлорсодержащие вещества. Хлор оказывает перфорирующее действие, расширяя поры мембраны. После этого она начинает промокать, переставая выполнять водоотталкивающие свойства.
  • Ополаскиватель и кондиционер. Их действие направлено на смягчение волокон ткани. Таким образом они разрыхляют волокна мембраны, и она теряет свои свойства, начиная промокать и плохо удерживать тепло.
Большинство стиральных порошков не подходит для стирки мембраны.

Выбирайте подходящее средство для стирки, избегая запрещенных и переходите к стирке, которую также нужно правильно организовать.

Как правильно ее стирать

Существует два способа стирки любой мембраны: ручной и автоматический. Прежде чем приступить к стирке, запомните, что нельзя делать с мембранной одеждой:

  • Стирать при высоких температурах. Даже 40 градусов – это много. Подбирайте температуру воды не выше 30 градусов. Если жидкость предназначена для холодной стирки, можно взять воду комнатной температуры.
  • Отжимать. При стирке руками отжимать вещи, не скручивая или просто их стряхнуть. При машинной – ставить режим без отжима.
Хорошие моющие средства для мембраны должны иметь несколько отличий.

На самом деле, ограничений и правил немного, но их необходимо запомнить и соблюдать.

Руками

Если не знаете, как стирать мембранную одежду в стиральной машине или боитесь, воспользуйтесь для начала ручной стиркой.

  1. Наберите в таз воды так, чтобы она покрывала вещь.
  2. Добавьте жидкости для стирки в соответствии с указанной дозировкой.
  3. Постирайте одежду, стараясь не сильно тереть поверхность.
  4. Отожмите ее не выкручивая.
  5. Повесьте сушить на улице или на балконе подложив впитывающую тряпку.
Не пренебрегайте советами специалистов относительно стирки мембранной одежды.

Существует миф, что стирать мембранную одежду в стиральной машине нельзя. Поэтому многие боятся предавать ее машинной стирке. На самом деле, класть мембранные изделия в стиралку можно, только для этого нужно выбрать специальный режим.

Считается, что ручная чистка мембраны самая бережная.

В стиральной машинке

Стиралка также справится с мембранными изделиями, не нанося им вреда. Главное помнить, что температура стирки не должна превышать 30 градусов. Для этого нужно выбрать соответствующий режим.

Средства для стирки мембранных тканей в ассортименте есть в хозяйственных магазинах.
  1. Загрузите вещи в стиральную машину.
  2. В специальный отсек или баночку добавьте шампунь для стирки.
  3. Выберите деликатный режим.
  4. Поставьте режим без отжима.

По окончанию стирки совершите действия, аналогичны предыдущему параграфу.

Как сушить мембранную одежду, ухаживать после стирки

Такие вещи нужно сушить на балконе, подложив впитывающую тряпку, или на улице в тени.

Аккуратно обращайте с вещами из мембранной ткани.

Не допускать:

  • попадания прямых солнечных лучей;
  • сушки на батарее;
  • сушки вблизи источника тепла;
  • глажки.
Следуйте основным правилам ухода за мембранной одеждой.

Лучше всего хорошо расправить вещь и повесить ее на плечики в тень или на балкон. По окончанию сушки стряхнуть и повесить в шкаф.

Видео: как стирать мембранную одежду в стиральной машине

Мембранная одежда, стирка мембранной одежды

Чтобы мембранная ткань качественно защищала нас от дождя и перегрева, ей требуется особый уход. Тогда спортивная одежда наверняка сохранит все те свойства, ради которых мы её и покупаем.

Водонепроницаемые дышащие ткани выполняют несколько функций: препятствуют проникновению внешней влаги внутрь и обеспечивают выход молекул пара (которые образуются, когда человек потеет) через поры мембраны. Для дополнительной защиты от дождя ткань обрабатывают водоотталкивающей пропиткой.

Так как мембрана имеет пористую структуру, в эти поры может попадать грязь и пот, из-за чего мембрана забивается и начинает терять свои «дышащие» свойства. Стирка обязательна. Но вот как не навредить одежде неправильным уходом?

Как стирать мембрану

  1. Мембранную одежду нельзя стирать обычным порошком. Ни в коем случае не используйте стиральные порошки или моющие средства, содержащие хлор. Молекулы хлора будут разрушать мембрану, и хоть она и начнёт лучше «дышать», параллельно с этим будет попросту промокать. Советуем приобрести специализированные средства, предназначенные для очищения именно мембранной ткани (на этикетке вы можете увидеть слова «для стирки спортивной одежды»). Если под рукой не оказалось средства, воспользуйтесь жидким мылом или обычным хозяйственным, не содержащим хлора. Мембрана останется целой, хотя мыло может и забить поры. Поэтому при первой же возможности выстирайте одежду ещё раз специальным средством для восстановления дышащих свойств.
  2. Мембранную ткань нельзя стирать при температуре выше 40 градусов. Высокая температура может повредить структуре ткани. Лучше всего следовать инструкции производителя, и если на этикетке написано, что запрещена стирка при температуре свыше 30 градусов, следуйте этой рекомендации.
  3. Полоскать мембранную одежду придётся дважды, чтобы полностью удалить остатки моющего средства.
  4. Функцию отжима в стиральной машине лучше отключить, ведь выкручивание и вытягивание материала строго запрещено.

Ксения Доброскок

сноубордистка

— Руководствуюсь одним правилом — стирать мембранную одежду как можно реже и без фанатизма. Иначе, каким бы средством вы ни пользовались, мембрана начнёт терять свои свойства и промокать.

Как сушить и гладить мембрану

Сушите мембранную одежду в расправленном состоянии. Никакой батареи, никакой сушки с помощью утюга. Как уже писали выше, высокая температура нарушит структуру ткани.

Как восстановить водоотталкивающее покрытие мембраны

Чаще всего при уходе игнорируется следующее: периодически мембранные материалы необходимо пропитывать. Обрабатывать можно только чистые вещи после стирки (верхний слой), всё это поможет сохранить хорошие водоотталкивающие свойства мембраны.

Сергей Аксёнов

инструктор по сноуборду международного класса, основатель школы катания на досках Board Academy

— Рекомендую исходя из личного опыта при стирке выворачивать вещи наизнанку, так как в этом случае лучше отстирывается подкладка. Лучше ставить режим стирки «Деликатные ткани», чтобы как можно меньше времени вещи проводили в стиральной машине. По поводу сушки — советую вещи вообще не выжимать, а через 10 минут, когда основная вода стечёт, повесить на сушилку. При выжимании ткань надувается пузырями, а это избыточное давление на мембрану, которая легко рвётся. Для самых неугомонных совет: после стирки с внешней стороны (на лицевую сторону одежды) можно нанести пропитку. Тогда вещи дольше не набирают в себя воду, например, при весеннем катании по слешу (слеш — это весенний снег, тяжёлый, мокрый, с крупными льдинками).

Подпишись на The Challenger!

Поделиться

Советы и рекомендации для блокирующих агентов

Для получения чистых и надежных результатов решающее значение имеют хорошие методы блокирования методом вестерн-блоттинга. Образцы белков сначала помещают в полиакриламидный гель для разделения белков по размеру. Затем белки переносятся на нитроцеллюлозную или ПВДФ-мембрану. Затем используется блокирующий агент для предотвращения неспецифического связывания первичных и вторичных антител с мембраной (области без интересующего белка). Надлежащие методы блокировки покрывают поверхность мембраны, не мешая связанному белку; таким образом предотвращая неспецифическое связывание антител и неспецифический сигнал (шум или фон) из-за высокого сродства мембраны к белкам.

Для правильной блокировки необходимо учитывать три фактора:

  1. Метод блокировки
  2. Блокирующий агент
  3. Буфер

Ниже приведены некоторые советы и приемы, которые следует учитывать, чтобы обеспечить прекрасные результаты вестерн-блоттинга.

Используйте надлежащие методы блокировки
  • Встряхивайте мембрану с выбранным блокирующим агентом с соответствующей скоростью (не слишком быстро/не слишком медленно) в течение 1 часа при комнатной температуре. Встряхивание необходимо для многих этапов вестерн-блоттинга (блокировка, промывка, инкубация первичных/вторичных антител). Правильная скорость обеспечит равномерную блокировку незанятых участков связывания на мембране, что предотвратит неспецифическое связывание первичных/вторичных антител.
    • Убедитесь, что мембрана размещена «белковой стороной вверх», а блокирующий буфер аккуратно омывает ее.
  • Полностью растворить блокирующий буфер: Блокирующие буферы часто готовят в спешке, но неправильно растворенные буферы могут привести к появлению черных точек на вестерн-блоте. Чтобы избежать этого, заранее подготовьте блокирующий буфер. Если черные точки сохраняются, отфильтруйте блокирующий буфер перед использованием, чтобы удалить твердые частицы.

Выбор блокирующего агента

При выборе подходящего блокирующего агента необходимо учитывать три фактора: совместимость антител, совместимость интересующего белка и система обнаружения. Некоторые распространенные буферы блокировки и советы по их использованию перечислены ниже.

  • Молоко сухое обезжиренное (2,5-5% раствор) является наиболее часто используемым и самым дешевым блокирующим агентом. Молоко не следует использовать, если интересующий белок фосфорилирован. Молоко содержит казеин, фосфопротеин, который связывается с антителами против фосфо, что вызывает неспецифическое связывание и высокий фоновый шум. Молоко может маскировать некоторые антигены, если их мало, что приводит к появлению слабых полос. Если появляются слабые полосы, уменьшите концентрацию до 1% в блокирующих растворах и растворах антител или замените на BSA.
  • Бычий сывороточный альбумин (БСА): Очищенный альбумин из бычьей сыворотки является вторым наиболее распространенным блокирующим агентом и используется в концентрации 2-5%. BSA можно использовать для обнаружения фосфорилированных белков. Однако препараты БСА содержат фосфорилированные соединения тирозина и вызывают сильный фоновый шум с антителами против фосфотирозина. Отфильтруйте BSA перед использованием. Нефильтрованный БСА может содержать загрязняющие IgG или сывороточные белки, которые могут вызывать фоновый шум. БСА несовместим с лектиновыми зондами, поскольку он содержит углеводы, которые увеличивают неспецифическое связывание.
  • Рыбий желатин чаще используется для иммуногистохимии, но его можно использовать и для вестерн-блоттинга в концентрациях 0,1–5 %. Рыбий желатин очищают от холодноводной рыбы и могут оставаться жидкими при более низких температурах. Желатин рыбы не вступает в перекрестную реакцию с антителами млекопитающих, поскольку не содержит белков сыворотки млекопитающих. Тем не менее, не используйте рыбий желатин с системами обнаружения авидин-биотин, поскольку он содержит эндогенный биотин.
  • Нормальная сыворотка  (бычья, кроличья, козья, мышиная и т. д.) встречается реже, поскольку используется в более высоких концентрациях (5-10%) и стоит дороже, чем молоко или БСА. Нормальная сыворотка несет иммуноглобулины, которые связываются с реактивными участками на мембране, что предотвращает неспецифическое связывание меченых антител IgG. Используйте сыворотку того же вида, что и вторичное антитело. Не используйте сыворотку того же вида, что и первичное антитело, поскольку это может привести к неспецифическому связыванию первичных антител через мембрану.
  • Патентованные коммерческие буферы содержат чистые фракции патентованного белка без альбумина, иммуноглобулинов, фосфопротеинов или биотина. Коммерческие буферы работают эффективно и дают высококачественные результаты, поэтому на блокировку тратится меньше времени. Доступны специальные протоколы для каждого коммерческого буфера.
  • Не содержащие белков блокирующие агенты
    • Поливинилпирролидон (ПВП) представляет собой альтернативу буферу, не блокирующему белки, который полезен для обнаружения небольших белков. PVP представляет собой водорастворимый полимер, который связывается с мембранами из нитроцеллюлозы и PVDF. ПВП обычно используется в концентрации 0,5-2% и обычно сочетается с очищенным казеином или другими блокирующими агентами.

Какой буфер использовать?

Блокирующие буферы используются для разбавления блокирующего агента и антител. Они состоят из солевого раствора с детергентом или без него (Tween 20, 0,05%) и блокирующего агента. Солевые растворы включают трис-буферный раствор (TBS; 50 мМ Трис и 150 мМ NaCl, pH 7,6) и фосфатно-солевой буфер (PBS, 140 мМ NaCl, 10 мМ фосфатный буфер и 3 мМ KCl, pH 7,4). Для большинства приложений они могут использоваться взаимозаменяемо, но в определенных условиях может потребоваться использование одного буфера вместо другого.

  1. PBS может влиять на щелочную фосфатазу, поэтому следует использовать TBS, если щелочная фосфатаза используется в качестве последующего субстрата.
  2. Низкие концентрации Tween 20 в блокирующем буфере и буфере для антител используются для предотвращения слабого неспецифического связывания. Специфическое связывание антител является сильным и не должно быть нарушено.
    • Растворы, содержащие детергенты, могут способствовать росту микробов, поэтому TBS или PBS с Tween должны быть приготовлены свежими перед использованием.
    • Для оптимальных условий анализа используйте тот же блокирующий буфер для разбавления антитела, который используется на этапе блокирования.

 

Другие советы и рекомендации для лучшего обзора вестерн-блоттинга:

  • 7 решенных распространенных проблем с вестерн-блоттингом
  • Неспецифическое связывание: почему его нужно блокировать в вестерн-блоттингах!

Блокирующие буферы для вестерн-блоттинга и ИФА | Thermo Fisher Scientific

Перед использованием антител для обнаружения белков, которые были нанесены точками или перенесены на мембрану, необходимо заблокировать оставшуюся связывающую поверхность, чтобы предотвратить неспецифическое связывание антител. В противном случае антитела или другие реагенты для детекции будут связываться с любыми оставшимися сайтами, которые изначально служили для иммобилизации представляющих интерес белков. В принципе, для блокирования можно использовать любой белок, который не обладает аффинностью связывания с целевым белком или компонентами зонда (антителами) в анализе. На практике, однако, некоторые белки работают лучше, чем другие, потому что они более последовательно связываются с мембраной или другой поверхностью иммобилизации или потому что они стабилизируют функцию других компонентов системы.

Исследование: блокирующие буферы вестерн-блоттинга Протоколы вестерн-блоттинга

Содержание страницы

  • Назначение и функция шагов блокировки
  • Типы буферов блокировки
  • Какой буфер блокировки использовать?

Назначение и функция блокирующих ступеней

Мембранные носители, такие как нитроцеллюлоза и поливинилидендифторид (ПВДФ), используемые в вестерн-блоттинге, обладают высоким сродством к белкам. Чтобы предотвратить неспецифическое связывание детектирующих антител на этапах после переноса, незанятые участки на поверхности мембраны должны быть заблокированы. Составы блокирующих буферов сильно различаются и могут содержать молоко, обычную сыворотку или высокоочищенные белки для блокирования свободных участков мембраны. Этап блокировки является обязательным и улучшает отношение сигнал-шум анализа за счет уменьшения фоновых помех. Недостаточное количество блокиратора приводит к чрезмерному фоновому шуму и снижению отношения сигнал/шум; напротив, чрезмерные концентрации блокатора могут маскировать взаимодействия антитело-антиген или ингибировать фермент-маркер, что вызывает снижение сигнала-мишени.

Типы блокирующих буферов

Несколько типов блокирующих буферов успешно используются в вестерн-блоттинге. Большинство блокирующих буферов для вестерн-блоттинга представляют собой инертные растворы либо смешанных белков, либо одного очищенного белка, которые в идеале практически не взаимодействуют с определяющими антителами или антигенами на блоте. Как правило, блокирующие агенты разводят либо в солевом растворе с трис-буфером (TBS), либо в фосфатно-солевом буфере (PBS) с детергентом или без него. Детергенты, такие как Tween-20, могут быть добавлены в блокирующий буфер для дальнейшего снижения неспецифического связывания. Количество Tween-20 (0,05%-0,2%) будет варьироваться в зависимости от силы используемых антител. Слабосвязывающиеся антитела могут быть смыты слишком большим количеством моющего средства при последующих промывках.

80148
Блокирующий буфер/Агент Преимущества Соображения
2-5% некатаного молока. Неподрышность, содержит множество типов белков. стратегии обнаружения и обнаружения фосфорилированных белков-мишеней. Из-за большого количества белков в молоке молоко может маскировать некоторые антигены и снижать предел обнаружения вестерн-блоттинга.
2–3 % бычий сывороточный альбумин (БСА) Хорошая альтернатива молоку, может использоваться в биотин-стрептавидиновых системах или при поиске фосфопротеинов В продаже имеются различные сорта БСА, которые могут влиять на отношение сигнал/шум . BSA, как правило, является более слабым блокатором, что может привести к более неспецифическому связыванию антител, но может увеличить чувствительность обнаружения белков с низким содержанием.
Очищенные белки (например, казеин) Буферы, блокирующие один белок, могут обеспечить меньшую вероятность перекрестной реакции с компонентами анализа, чем растворы сыворотки или молока. Идеально, когда блокаторы, такие как обезжиренное молоко, блокируют связывание антиген-антитело Дороже, чем традиционные рецептуры обезжиренного молока.

Какой блокирующий буфер использовать?

Выбор блокирующего буфера для вестерн-блоттинга часто зависит от системы. Определение правильного блокирующего буфера может помочь увеличить отношение сигнал/шум в системе. Иногда при переключении с одного субстрата на другой может потребоваться изменение блокирующего буфера, чтобы избежать проблем со снижением сигнала или усилением фона. Например, при применении конъюгата щелочной фосфатазы (ЩФ) следует выбирать блокирующий буфер в трис-буферном солевом растворе (ТБС), поскольку фосфатно-солевой буфер (ФСБ) препятствует активности ЩФ. Эмпирическое тестирование различных блокирующих буферов для использования с данной системой может помочь в достижении наилучших возможных результатов. Ни один блокирующий агент не подходит для любого применения, поскольку каждая пара антитело-антиген имеет уникальные характеристики.

Прилагаемые рисунки иллюстрируют ценность тестирования различных блокирующих буферов в рамках оптимизации вестерн-блоттинга. В этих примерах экспериментов, в которых все остальные условия были одинаковыми, различные блокирующие буферы подавляли или повышали чувствительность и специфичность вестерн-блоттинга для отдельных белков. В других случаях слабые блокирующие буферы могут вызывать появление неспецифических полос.

 Нажмите на изображение, чтобы увеличить его

Сравнение 2% BSA, 5% NF-Milk и блокирующего буфера StartingBlock при обнаружении pAKT. Метод. Серию разведений лизата клеток 293T, начиная с 10 мкг/лунку, загружали в гели Bolt 4–12% Bis-Tris-Plus и подвергали электрофорезу при 200 В в течение ~20 мин. Гели переносили на нитроцеллюлозные мембраны с помощью устройства для переноса геля iBlot 2 (протокол P0 в течение 7 мин). Иммуноблотинг обрабатывали с использованием автоматизированного процессора вестерн-блоттинга Bandmate. Мембраны блокировали либо 2% BSA (PBS), 5% обезжиренным молоком (PBS), либо блокирующим буфером StartingBlock. Мембраны исследовали с помощью Rabbit Anti-pAKT (1:1000, № по каталогу MA5-149).16) разводят соответствующим блокирующим буфером. За этим последовала инкубация с HRP-конъюгированным козьим антикроличьим IgG (1:2500 или 0,04 мкг/мл, № по каталогу 32460). Детекцию хемилюминесценции проводили с использованием хемилюминесцентного субстрата SuperSignal West Pico PLUS. Мембраны визуализировали в системе визуализации iBright.

При обнаружении pAKT в лизатах клеток 293T 2% BSA и блокирующий буфер StartingBlock обеспечили самую высокую чувствительность. Однако 2% БСА слабо блокировал неспецифическое связывание детектирующих антител, что видно по неспецифическим полосам при более высокой общей нагрузке лизатом. 5% NF-Milk обеспечивает самый низкий фон, но цена достигает предела обнаружения.

Нажмите на изображение, чтобы увеличить мин. Гели переносили на нитроцеллюлозные мембраны с помощью устройства для переноса геля iBlot 2 (протокол P0 в течение 7 мин). Иммуноблотинг обрабатывали с использованием автоматизированного процессора вестерн-блоттинга Bandmate. Мембраны блокировали 5% BSA (PBS), 5% обезжиренного молока (PBS), 1% казеина (PBS) или блокирующим буфером StartingBlock. Мембраны исследовали с помощью Rabbit Anti-Hsp9.0 (1:5000, № по каталогу MA1-10372), разбавленным соответствующим блокирующим буфером. За этим последовала инкубация с HRP-конъюгированным козьим антикроличьим IgG (1:1000 или 0,01 мкг/мл, кат. № 32460). Детекцию хемилюминесценции проводили с использованием хемилюминесцентного субстрата SuperSignal West Pico PLUS. Мембраны визуализировали в системе визуализации iBright.

При обнаружении Hsp90 в большом количестве в лизатах клеток 293T все протестированные блокирующие буферы обеспечивали приемлемые отношения сигнал/шум. 5% БСА демонстрировал более высокий уровень неспецифического связывания с антителами для обнаружения, но обеспечивал хорошую чувствительность.

Рекомендации по флуоресцентному вестерн-блоттингу

Частицы и загрязняющие вещества в блокирующих и промывочных буферах могут оседать на мембранах и создавать флуоресцентные артефакты, поэтому при флуоресцентном вестерн-блоттинге важно использовать высококачественные отфильтрованные буферы. Кроме того, ограничьте использование детергентов на этапах блокировки, так как обычные детергенты могут самофлуоресцировать, что может привести к увеличению неспецифического фона.

 Нажмите, чтобы увеличить изображение

Метод: Серию разведений лизата клеток A431, начиная с 15 мкг/лунку, наносили на гели Bolt 4–12% Bis-Tris-Plus и подвергали электрофорезу при 200 В в течение ~20 мин. Гели переносили на нитроцеллюлозные мембраны с помощью устройства для переноса геля iBlot 2 (протокол P0 в течение 7 мин). Мембраны блокировали блокирующим буфером Blocker FL, 5% обезжиренным молоком (TBS) или другим специальным блокирующим буфером. Мембраны исследовали анти-EGFR, анти-Stat3 или анти-Ras10, разведенными в соответствующем блокирующем буфере. За этим последовала инкубация с конъюгированным с Alexa Fluor Plus 800 козьим антикроличьим IgG и Alexa Fluor Plus 680 козьим антимышиным IgG. Мембраны визуализировали в системе визуализации iBright.


Рекомендуемые блокирующие буферы Thermo Scientific для вестерн-блоттинга
Select when Thermo Scientific product Blocking agent Highlights When to use Available formats
Chemiluminescent western blotting
Optimizing a new western blot system Блокирующий буфер StartingBlock Отдельный очищенный белок, не содержащий сыворотки и биотина
  • Хорошо работает с широким спектром антител и комбинаций антител
  • Совместим со стрептавидиновыми системами
  • Блокирует менее чем за 15 минут и повторное исследование вестерн-блотов
 PBS
TBS
PBST
TBST
Традиционные блокаторы не обеспечивают достаточной чувствительности Блокирующий казеин Очищенный казеин
  • Высокоэффективная замена самодельным блокирующим буферам для молока
  • Блокирующий буфер с одним белком обеспечивает меньшую вероятность перекрестной реакции с компонентами анализа, чем растворы сыворотки или молока
  • 2 07 904
              Ориентация на белки с высоким содержанием меди или использование антител с высокой аффинностью
            • Высокий фон наблюдается при использовании блокаторов обезжиренного молока

PBS
TBS

Targeting phosphoproteins or need highest level of sensitivity Blocker BSA Purified BSA
  • 10% solution of high-quality BSA
  • Single purified protein provides fewer chances of cross- реакция с компонентами анализа, чем растворы сыворотки или молока
  • Использование при нацеливании на фосфопротеины
  • Лучше всего использовать при хранении повторно используемых антител в блокаторе

10X PBS concentrate

10X TBS concentrate

Fluorescent western blotting
Performing fluorescent western detection Blocker FL Fluorescent Blocking Buffer (10x) Single purified protein
  • Блокирует избыточные сайты неспецифического связывания, помогая уменьшить фоновую флуоресценцию
  • Работает как с нитроцеллюлозными мембранами, так и с мембранами из ПВДФ с низкой флуоресценцией
  • Не содержит моющих средств
  • Блоки за 15–30 минут
 Визуализация и хранение сухих флуоресцентных блотов 10-кратный концентрат

Дополнительные доступные блокирующие буферы

  Blocking agent Highlights When to use Available formats
Pierce Clear Milk Blocking Buffer Очищенные и стабилизированные молочные белки
  • Высокоэффективная замена буферам, блокирующим молоко в домашних условиях
  • Длительный срок хранения при комнатной температуре хемилюминесцентные применения
 Борат, pH 7,6
Блокирующий буфер для рыбьей сыворотки Сыворотка стального лосося
  • Useful in detection methods involving mammalian samples
  • Particularly effective in applications involving multiplex fluorescence imaging
  • With mammalian samples
  • Multiplexing fluorescence western blotting
 PBS
SuperBlock Blocking Buffer Очищенный гликопротеин без сыворотки и биотина
  • Состав на основе белка не содержит иммуноглобулинов, альбумина или эндогенного биотина, что делает его совместимым во многих ситуациях, когда традиционные блокирующие агенты не действуют
  • Biotin-free for use with streptavidin system
  • Blocks in less than 10 minutes
  • High background with current blocking buffer
 PBS
TBS
PBST
TBST
Blocker BLOTTO Сухое обезжиренное молоко
  • Готовый к употреблению 5% раствор обезжиренного сухого молока
  • Удобный, готовый к применению
  • Более стабильный продукт по сравнению с самодельными блокаторами
 TBS
Блокирующий буфер, не содержащий белков Соединение, не блокирующее белки