Средство для стирки мембраны: Обзор лучших средств для стирки мембранной одежды: характеристики, отзывы

Средство для стирки мембранной одежды

Иногда стирка одежды может поставить вас перед выбором средства для стирки, особенно, если в вашем гардеробе появилась вещь из незнакомой ткани. Одной из таких тканей может стать мембрана. Из нее часто шьют спортивную одежду, вещи для туристов и детей. Этот материал обладает уникальными свойствами, а потому и средства, чтобы постирать этот материал, нужны специальные. Что это за средства, как их выбрать, и как стирать?

«Чудо» свойства ткани

Мембрана представляет собой особый слой внутри ткани, в виде сетки с мельчайшими порами. Мембрану с двух сторон покрывают специальной защитой. Верхний слой ткани с мембраной – это  износостойкий материал. Благодаря многослойности мембранная ткань имеет следующие свойства:

• отталкивает воду, что позволяет не промокать под дождем;
• хорошо «дышит», что означает, что в такой непромокаемой одежде не придется потеть, так как испарения легко проходят наружу;
• ветронепродуваема, это делает ее комфортной для любой погоды;
• легкая и сохраняет тепло, поэтому из мембранной ткани не делают утеплители, за исключением пуховиков и зимних курток, мембрана не пропускает холод вовнутрь.

К сведению! Мембранная ткань довольно дорогая, поэтому прежде чем использовать что-то для стирки, убедить, что средство подходит для такого типа одежды, ведь испортить дорогостоящую вещь более чем неприятно.

Требования к средствам

Какое же средство для стирки лучше выбрать, каким оно должно быть? Чтобы ответить на этот вопрос нужно исходить из свойств ткани, которые мы описали выше. Вот несколько требований к средству для стирки мембранной ткани:

• оно не должно содержать хлор, так как хлор испортит водоотталкивающее свойство ткани;
• оно не должно содержать большого количества энзимов, которые воспринимают пропитку ткани, как грязь, разрушая ее;
• средство не должно содержать кислородный отбеливатель, так как он забивает поры мембраны, ткань перестает «дышать»;
• в составе не должно быть крупных абразивных частиц.

Учитывая эти требования, с уверенностью можно сказать, что для стирки мембраны не подходит:

1. любой порошок, Taid, Ariel, Persill и другие;
2. обычные жидкие средства для стирки, в них содержаться энзимы;
3. отбеливатели и пятновыводители;
4. средства для стирки деликатной одежды, типа «Ласка», «Ворсинка» и т.п.;
5. жидкое мыло.

Вывод: стирать одежду из мембраны можно только специальными средствами, предназначенными для определенного вида одежды.

Например, есть отдельные средства для спортивной одежды и для верхней одежды с утеплителем. Если такого средства под рукой не оказалось можно использовать хозяйственное мыло, не содержащее хлор. Но стирать им одежду постоянно не стоит, со временем ткань начнет терять свои «дышащие» свойства.

Краткий обзор

На рынке бытовой химии есть множество средств, чтобы постирать одежду из мембраны, от разных производителей, приведем несколько примеров.

• Perwoll Sport & Active – жидкое средство, предназначенное для стирки спортивных вещей, с запахом свежести. Этим средством можно стирать комбинезоны, термобелье, спортивные костюмы и куртки, брюки из болоньевой ткани и эластика.
• Tech Wash фирмы Nikwax – специальное биоразлагаемое жидкое мыло для мембраны, способствует сохранению водоотталкивающих свойств ткани. Также оно используется для стирки нейлоновых и хлопковых тканей, брезента, GoreTex, Dry Factor, Sympatex, Ultrex. Им стирают палатки, рюкзаки, альпинистские веревки. Данное средство продается в концентрированном виде, а потому подходит для выведения пятен.
  
  
• Domal «Sport Fein Fashion» – немецкое средство. Тщательно очищает одежду от разных видов загрязнений, не влияя на свойства тканей. Одного флакона средства объемом 750 мл хватает на 25 кг сухого белья, что весьма экономично.
• Denkmit Fresh Sensation – гелеобразное средство, подходящее для мембраны, справляющееся с загрязнениями и запахами. Однако он придает ткани водоотталкивающие свойства.
  

Как стирать и ухаживать

Самый бережный способ стирки мембраны – ручной. Необходимо намочить изделие в чуть теплой воде, а затем нанести одно из специальных средств, а после смыть его под струей воды. Не выкручивайте изделие, пусть вода сама стечет с вещи. Этот способ понравится немногим, так как ни время, ни сил на ручной труд  при наличии машины автомат тратить не хочется.

Чтобы постирать одежду из мембраны в машине, нужно соблюдать правила:

• стирать в одном из режимов: «ручная стирка», «шерсть», «спортивная одежда»;
• отрегулировать температуру на 30 ⁰;
• отключить отжим;
• не использовать режим замачивания или предварительной стирки, а также режим сушки в машине;
• стирать крупные изделия в отдельности.

После стирки в машине изделие раскладывают на горизонтальной поверхности и в таком виде сушат в хорошо проветриваемом помещении. Нельзя сушить мембрану у огня или батареи, а также гладить утюгом. При необходимости после сушки мембранную одежду пропитывают специальным водоотталкивающим составом. Это продлит срок службы изделий. Если вы заметили, что одежда в некоторых местах стала промокать, то эта процедура просто необходима.

Для пропитки можно использовать средство Down Proof фирмы Nikwax. Защитное средство в виде спрея наносят на поверхность одежды и ждут полного высыхания. Жидкую пропитку необходимо применять во время полоскания изделий. Данную процедуру необходимо делать через одну-пару стирок, частая пропитка приведет к забиванию мембраны, она утратит другие свои свойства.

Важно! Водоотталкивающие пропитки нужно использовать только после стирки одежды и строго в соответствие с инструкцией.

Итак, стирать мембранную одежду несложно, ведь с появлением нового материала появились и средства по уходу за ними. Покупайте средства от проверенных производителей и стирайте согласно рекомендациям на этикетке. И тогда ваша одежда всегда будет в отличном состоянии.

   

• Поделитесь своим мнением — оставьте комментарий

Средство для стирки мембранной одежды – надо ли?

Мембранная ткань

Средство для стирки мембранной одежды – есть ли в нем необходимость, или же можно проводить чистку обычными порошками? Для начала разберем, что такое ткань из мембраны, для чего она предназначена, и как происходит ее чистка. Также мы детально расскажем и покажем в видеоматериалах весь процесс стирки.

Свойства ткани

Прежде чем подбирать порошки, нужно выяснить, какими свойствами обладает ткань. Некоторые изделия трудно отстирать в машинке, но хорошо чистятся в тазу. Перепоночные ткани защищают одежду от намокания, однако выводят пары наружу. Она используется:

• Для производства непромокаемой обуви;
• В верхних слоях одежды;
• На аксессуарах;
• В изготовлении сумок;
• Для защиты агрегатов от попадания влаги.

Диафрагменная ткань также считается непродуваемой, отличается пропитками и свойствами. Некоторые из них используются для занятия активными видами зимнего спорта, другие предназначены для спокойного отдыха с детьми. Существуют следующие типы мембранной поверхности:

В зависимости от типа вашей ткани следует выяснить, как стирать мембранную одежду в стиральной машине.

Правила стирки

В стиральной машине можно проводить чистку мембранной одежды, но не обуви. Для этого всегда важно правильно выбрать режим. Это будет зависеть от комбинации поверхностей.

Многослойные ткани	Они требуют очистки через деликатный режим. При этом категорически нельзя дополнять процесс отжимом. Температура должна быть 20 градусов и не более.
Комбинированные ткани	Мембрана, содержащая несколько слоев и имеющая между ними пористые прокладки, не должна стираться в стиральной машине, если там нет режима «ручная стирка».
Ткань с прослойками	Лучше всего отдать предпочтение щадящему режиму, температуру выбрать до 30 градусов. Сушка должна проводиться в горизонтальном положении.
Ткань с подкладкой	Исходя из того, какая подкладка есть на мембране, можно выбрать тот или иной режим, соответствующий деликатной настройке машины.

Совет: Не применяйте агрессивных средств при мойке. Некоторые хозяйки спрашивают, а можно ли стирать мембранную одежду обычным порошком. Нет, любой порошок забивается в поры перепонки, от чего она перестает «дышать», теряя свои свойства.

Средства

Поскольку сыпучие средства не предназначены для такого типа белья, чем стирать мембранную одежду, расскажем далее.

DOMAL Sport Fein Fashion

Бальзам для стирки спортивной одежды подходит для полиэстера, ткани с перепонками и синтетических волокон. Хорошо отстирывает пятна в машинке автомат.

Nikwax Tech Wash

Моющее предназначено для глубокой очистки поверхности мембранной одежды с функцией пропитки. Поскольку простыми средствами пропитывать ткань не рекомендуется, подойдет такой жидкий порошок. Также он сохраняет водоотталкивающие свойства ткани и не нарушает верхний слой «

дышащей» оболочки.

Denkmit Fresh Sensation

Гель для стирки мембранной одежды, который хорошо справляется с трудными пятнами, однако не имеет пропитки. Она необходима для сохранения долговечности ткани. Но можно отдельно приобрести такую аэрозоль от фирменного производителя.

Perwoll Sport & Active

Единственное средство, которое можно применять для тканей с диафрагменными прослойками. Также подходит для чистки обуви и другой различной спортивной одежды и аксессуаров. Можно применять для ручной стирки.

Хозяйственное мыло

Ничего удивительного, ведь состав его имеет натуральные компоненты с химической базой. Возможна только ручная стирка.

Подобные средства для стирки мембранной одежды лучше покупать в специализированных магазинах, где снижен риск приобретения подделок. Если вы не смогли найти какие-либо моющие, нет у вас пропитки или аэрозоли, не поддавайтесь соблазну пойти в химчистку.

Ручная чистка

Кроме стиральной машинки быстро очистить одежду помогут наши советы для проведения ручного застирывания. Ниже инструкция покажет, как правильно стирать мембранную одежду, и что стоит запомнить в процессе сушки.

Таз	Подготовьте воду температурой 20-30 градусов. Положите на 20 минут одежду в воду, дождитесь, когда она полностью пропитается. Не всегда верхний слой впитывает жидкость даже при длительном замачивании, поэтому чередуйте – переворачивайте разными сторонами одежду к поверхности воды.
Моющее	Выберите гель из вышеперечисленных средств или воспользуйтесь хозяйственным мылом. Натрите поверхность ткани средством. Не добавляйте его в воду, оно не впитается в поры ткани. При этом прямое нанесение возможно только руками без использования губок и щеток.
Стирка	Чистить в тазу ткани из перепонок можно только при помощи проточной воды. После нанесения моющего, промыть под струей. Холодная вода должна вымыть все остатки чистящих компонентов.
Промывка	Промыть и смыть все компоненты средства нужно без использования скручивания или отжима. Вообще никаких манипуляций с тканью делать нельзя.
Сушка	Сушить мембранную одежду можно и в вертикальном положении. Вода будет стекать вниз. Переворачивайте вещь, чтобы капли, застрявшие в порах, стекали обратно и испарялись быстрее.

Совет: Стирка одежды из мембранной ткани, а также сушка, должны проводиться согласно предписаниям, которые отмечены на ярлыке изделия.

В противном случае, если вы не нашли специальных средств, которые указаны на фото, не можете подобрать режим в стиральной машине, или же цена гелей и пропиток вам просто недоступны, вы можете прибегнуть к стирке хозяйственным мылом. Выбирайте детские или те виды, которые содержат примеси смягчающих компонентов. Видео в этой статье

также расскажет, чем пользуются хозяйки в подобных случаях, чтобы начисто вымыть одежду, не испортив ее свойств.

Стиральный порошок для мембраны

Cредство для стирки мембранной одежды

Мембранная одежда очень популярна: она удобна, практична, противостоит влаге, долго не пачкается. Но для того, чтобы она сохранила свои свойства необходимо использовать деликатную стирку. Не стоит использовать обычные стиральные порошки. Простые стиральные порошки имеют довольно крупные частички, которые способны забиваться в мембрану и разрушать её. Это влияет на специфические качества мембранной одежды, хотя при этом не страдает внешний вид.

Стиральный порошок для мембранной одежды

Мембранная одежда имеет специальную пропитку, которая защищает одежду от загрязнений. Но при использовании не подходящих жидких средств, энзимы, что в них содержаться, разрушают этот защитный слой. Вещества энзимы «понимают» пропитку как грязь, что нужно отмыть и активно с ней бороться. Поэтому нельзя использовать просто жидкие порошки, не предназначенные для стирки мембраны. Необходимо всегда иметь стиральный порошок для стирки мембранных тканей.

Как стирать мембрану в стиральной машине

Иногда на мембранной одежде образуются пятна, которые вывести тяжело. Но не стоит использовать отбеливатели. Особенно не нужно применять те, что созданы на основе кислорода. Они забиваются в мембраны. Одежда больше не может «дышать», её свойства утрачиваются. Отбеливатели, что имеют хлорку, хорошо могут очистить, но одежда будет промокать.

Порошок для мембранных тканей

Стиральный порошок для стирки мембранной одежды должен быть специфическим. На этикетке часто указывают для чего именно данное средство: для одежды, обуви или спортивного снаряжения. Используйте только средство, предназначенное для конкретного типа. После стирки иногда требуется повторная пропитка. Её также нужно делать с помощью специальных средств, но не очень часто. Если использовать такие средства постоянно, мембрана забьется, и вещь не будет эффективной при носке. Самые новые средства для стирки мембранной одежды двухкомпонентные. Они одновременно очищают грязь и восстанавливают защитный слой.

Средство для стирки мембранных тканей

Если использовать правильные средства для стирки мембранной одежды, она прослужит долгие годы. Именно такие качественные и сертифицированные продукты вы можете приобрести на нашем сайте greenclean.ua. Здесь вы найдете стиральный порошок для стирки мембраны, который не только надежно очистит одежду, но и не принесет ей вред, сохранив вес важные функции. У нас вас порадуют невысокие цены, бесплатная доставка и быстрота выполнения заказов.

Как и чем стирать мембранную одежду в стиральной машине: эффективные средства

Характерные особенности

Чтобы постирать одежду из мембранной ткани, следует соблюсти целый ряд условий, поскольку испортить ее может даже самая незначительная мелочь.

При стирке ни в коем случае нельзя:

1. 1Использовать обычный порошок и кондиционер для белья. Это связано с тем, что стандартный порошок создает густую пену, которая способна забить микропоры материала, ткань после этого перестанет дышать. По этой же причине не рекомендуется использовать и кондиционер.
2. 2Ни в коем случае нельзя применять различные отбеливатели и пятновыводители, активным компонентом в которых является хлор, поскольку он приводит к разрушению связей между волокнами ткани.
3. 3После стирки нельзя выжимать изделие, поскольку сильное перекручивание может повредить мембранную пленку в местах сгиба, что нарушит целостность покрова.
4. 4Одежда из мембранной ткани абсолютно не переносит воздействия высоких температур, поэтому сушка около батареи или на открытом солнце таким вещам противопоказана.
5. 5Ни в коем случае нельзя замачивать такие изделия и подвергать их машинной стирке даже в деликатном режиме. Лучше всего в этом случае подходит аккуратная стирка руками.

Рекомендуем ознакомиться

Основные требования к моющим составам

Поскольку основная задача при стирке мембранной одежды — это не причинить ей вреда, то при выборе средств стоит учитывать некоторые нюансы:

1. 1Средство не должно содержать хлор, поскольку он нарушает водоотталкивающие свойства материала.
2. 2Не следует использовать отбеливатель на основе кислорода, поскольку свободные кислородные частицы забивают поры мембраны и ткань перестает дышать.
3. 3В составе средства для стирки не должно быть крупных абразивных элементов.

Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что для стирки на в коем случае не подойдут популярные порошки (Tide, Persil и другие), жидкие аналоги этих средств, пятновыводители и отбеливатели для любых видов тканей, жидкое мыло, а также средства для деликатной стирки изделий из шерсти, кашемира, шелка (Ласка, Ворсинка и прочие).

Ассортимент подходящих товаров

Поскольку использование обычных порошков по отношению к мембране невозможно, давайте рассмотрим, какие же моющие средства применимы в отношении мембранной одежды.

Во-первых, по возможности стирать мембранную куртку все же лучше вручную, но если это не представляется возможным сделать, то в крайних случаях можно использовать самый щадящий режим стиральной машины без отжима.

Рассмотрим список наиболее популярных и доступных средств, используемых для стирки мембраны:

1. 1DOMAL Sport Fein Fashion — это моющее средство, выполненное в виде жидкого бальзама. Обычно его используют для очистки различного спортивного обмундирования, выполненного из синтетических волокон. На мембраны применение этого средства не окажет отрицательного воздействия, поэтому применять его можно по мере загрязнения материала.
2. 2Nikwax Tech Wash. Это замечательное средство, применение которого не только чудесно борется с загрязнениями различного типа, но еще и оказывает положительный эффект на ткань. Связано это с тем, что средство пропитывает мембранный слой одежды и восстанавливает дышащие и водоотталкивающие свойства материала. Это средство незаменимо в том случае, если куртку с мембраной постирали с использованием обычного моющего средства. Новая стирка с Nikwax Tech Wash позволит исправить все негативные последствия такого шага, вымоет из пор мембраны все частички порошка и восстановит защитные свойства материала. Приобрести данный препарат можно в любом специализированном центре, занимающемся продажей туристической одежды и принадлежностей для походов.
3. 3Denkmit Fresh Sensation. Среди своих собратьев данный жидкий гель для стирки выделяется достаточно невысокой ценой. Однако при его применении не происходит пропитки мембраны, поэтому ее защитные свойства не восстанавливаются, из-за этого срок службы одежды уменьшается. Поэтому применение такого средства не рекомендуется довольно часто. Но при этом средство способно очистить одежду от любых видов загрязнений, не оставив от них и следа.
4. 4Perwoll Sport Active. Один из самых популярных гелей для стирки спортивной одежды и вещей из мембранной ткани. Данный препарат имеет консистенцию жидкого геля для душа. Его можно также использовать для стирки обуви с применением стиральной машины. Гель обладает достаточно приятным ароматом и при стирке пропитывает им материал одежды. Поэтому после высыхания вещи имеют приятный аромат и не подвержены прилипанию других запахов.
5. 5Textile Wash Plus Woly — еще одно средство, применяемое для стирки вещей из мембраны. Обладает хорошими моющими качествами и не вредит мембранной пленке на поверхности одежды.

Если вам все же не удастся отыскать специальное средство для стирки мембраны, то помощь в этом деле может оказать обычное хозяйственное мыло. Для использования этого средства необходимо приготовить средний мыльный раствор в теплой воде и постирать в нем изделие. Такой раствор замечательно очищает от любых загрязнений ткань, при этом легко смывается и не забивает поры мембраны своими частичками.

В основном все средства для стирки мембранной одежды продаются в специализированных магазинах по продаже обмундирования для туристов и спортсменов. Однако сейчас можно встретить емкости с этими средствами и на полках хозяйственных отделов крупных гипермаркетов. Однако перед покупкой в таком месте внимательно прочитайте состав средства, чтобы исключить опасные для мембранной ткани составляющие.

Категорически запрещается использовать моющие средства, имеющие в своем составе хлор, поскольку он уничтожает полностью все защитные свойства этого материала.

Сейчас достаточно распространено использование мембранной ткани для производства детской верхней одежды. Такая одежда подвержена достаточно быстрому загрязнению, поэтому ее приходится часто стирать. Из-за этого слой мембраны на поверхности одежды постоянно истончается и может исчезнуть совсем. Именно поэтому после каждой стирки следует использовать специальные составы для дополнительной пропитки изделий с целью восстановления первоначальных защитных свойств материала.

Для облегчения выбора средств по уходу за мембранной одеждой следует проконсультироваться у продавца, который продает вам товар. Он может порекомендовать неплохие варианты. Перед стиркой тщательно изучите инструкцию, которая обязательно должна быть расположена на ярлыках внутри изделия.

Общие рекомендации

Самым оптимальным вариантом для изделий с мембраной служит ручная стирка, однако возможно и использование щадящих режимов стиральной машины. Существует несколько вариантов стирки мембранной одежды:

1. 1Ручная стирка. Процедура проведения ручной стирки достаточно обычная. Нужно подготовить емкость с теплой водой и положить в нее изделие. После этого одежду нужно достать из воды и натереть любым средством, описанным выше. Места с сильными загрязнениями нужно потереть особенно тщательно. Затем изделие следует сполоснуть под струей теплой проточной воды. Если загрязнения не исчезли полностью, то процедуру можно повторить. Если же все отстиралось, то изделие можно немного отжать, при этом избегая перекручивания и сильного сжатия. После этого изделие нужно разложить на ровную горизонтальную поверхность и оставить для полной просушки. Следует избегать попадания прямого света на вещь в процессе сушки, а также избегать воздействия теплом. Желательно разместить вещь во время сушки в проветриваемом месте.
2. 2Стирка в стиральной машине. Если ручная стирка вещи невозможна, то можно прибегнуть к использованию стиральной машины. Но чтобы не испортить вещи машинной стиркой, следует соблюдать некоторые меры предосторожности. Например, стирать такую одежду нужно отдельно от других вещей. Если вещь достаточно крупная, то стирать его нужно отдельно. В современных стиральных машинах может быть заложена программа для мембраны, если ее нет, то стоит выбрать самый щадящий режим для стирки шерсти или шелка. Обязательно убедитесь в том, что температура установлена не выше 30 °С и отключена функция отжима, даже деликатного. Только после этого можно запускать цикл стирки. После завершения цикла можно аккуратно провести отжим изделия. Делать это нужно очень осторожно, избегая скручивания одежды. Еще лучше производить отжим с использованием хлопкового полотенца. Для этого изделие из мембраны нужно завернуть в полотенце и подождать некоторое время, пока влага не впитается в полотенце. После этого изделие можно немного отжать.

Сушка изделия должна происходить без какого либо теплового воздействия, с избеганием попадания прямых солнечных лучей. Изделие нужно равномерно распределить по ровной горизонтальной поверхности и оставить до полного высыхания. Желательно постоянное проветривание помещения, в котором происходит сушка одежды.

Категорически запрещается использовать батареи, радиаторы и прочие нагревательные элементы для сушки изделий из мембраны.

Правила ухода

Поскольку на мембрану нельзя воздействовать высокими температурами, то глажка таких вещей категорически запрещена, поскольку это приведет к полному исчезновению всех полезных свойств материала.

После каждой стирки стоит обрабатывать вещи специальными спреями и составами для поддержания защитных свойств ткани в первоначальном виде. Использование таких средств позволяет создать защитный слой дополнительно к уже имеющейся мембранной пленке.

Использование специальных моющих средств позволит продлить жизнь изделиям из мембраны, поэтому позаботьтесь об их покупке.

Для хранения вещей из мембраны лучше всего использовать специальные мешки для верхней одежды, чтобы предотвратить попадание пыли на вещи. Изделие при этом должно быть предварительно постирано и высушено. Вещи должны быть расправлены, быть без заломов и загибов и находиться в горизонтальном положении на протяжении всего времени хранения.

Средства для стирки мембранной одежды

В современном мире очень быстро развиваются технологии. И в повседневной жизни тоже. Например, не так давно стал известен материал, изготовленный из мембраны. Одежда, выполненная из такой ткани, стала востребованной у спортсменов и родителей, которые приобретают мембранную одежду для детей.

Если мембранная одежда так популярна, то сразу появляется вопрос, какой уход за ней и как ее стирать. Для этого нужно узнать, как устроен этот материал и какие у него свойства.

Содержание

Что такое мембранная одежда и какие у нее свойства

Сразу стоит понять, что стирка этой одежды отличается от обычной. Даже потому что мембрана состоит из сетки, у которой есть большое количество пор, которые препятствуют проникновению в них влаги.

При неправильном уходе одежда из такого материала может быть безнадежно испорчена и утратит все свои свойства. Стоит запомнить следующие правила. Данные правила относятся к стирке ручным способом и стиральной машинкой.

Что нельзя делать с тканями из мембраны

• Ткани из мембраны очень чувствительны. Их нельзя стирать обычным стиральным порошком. Они забивают поры и свойства мембранных тканей перестают работать.
• Нельзя стирать при повышенной температуре. Поры могут слипнуться между собой и цвет изделия поменяться. Поэтому рекомендуемая температура 40 градусов. Не выше!
• Исключить при стирке хлор. Хлор снижает водоотталкивающие свойства ткани.
• Нельзя выжимать ткань. Это повредит материал и внешний вид изделия.
• Сушку вблизи теплых батарей стоит исключить.
• Гладить изделие противопоказано.
• Кондиционеры и бальзамы стоит отложить в дальний угол. В составе имеются вещества, которые негативно влияют на мембрану.

Какое средство использовать

Прежде чем начать стирать, необходимо разобраться, какими средствами и способами можно стирать. Точно известно, что не рекомендуется стирать одежду с применением простого порошка и мыла. Для такой ткани необходимо специальное средство для стирки. Рассмотрим самые популярные из них:

1. DOMAL Sport Fein Fashion – это средство представляет собой некий бальзам для спортивной одежды.
2. Nikwax Tech Wash – не вредит поверхности мембраны и даже поддерживает свойства водоотталкивания.
3. Denkmit Fresh Sensation – гель предназначен для стирки. Стоимость у него доступная, но он не поддерживает водоотталкивающие свойства.
4. Хозяйственное мыло – отлично подойдет для стирки одежды. Но только для ручного удаления загрязнений.

Теперь стоит рассмотреть способы стирки мембранных тканей.

Ручная стирка мембранной одежды

Изделие должно быть подготовлено. Например, если вы собираетесь постирать куртку из мембраны, то необходимо застегнуть все замки.

Прежде чем приступить к самой стирке, вам потребуется хорошенько смочить ткань в холодной воде. После необходимо обработать загрязненные участки средством, которое предназначено для мембранных тканей. Далее тщательно прополоскать изделие под водой комнатной температуры. Или набрать достаточное количество воды в емкость. Если потребуется, то повторить всю процедуру.

Необходимо обратить внимание на полоскание и сушку изделия. Прополоскать одежду требуется два или более раз. Это требуется ткани. Для того чтобы она смогла дышать и не забились поры.

Стирка одежды в автоматической машинке

Этот способ весьма рискован. Потому что испортить ткань гораздо легче машинкой. Нужно быть аккуратным и не забывать про правила стирки в машинке-автомат.

1. Для начала необходимо заложить изделия в стиральную машину, учитывая, что крупные вещи стираются отдельно от мелких.
2. Выбирается самый щадящий режим стирки. Чаще всего это режим «шерсть» и «ручная стирка». А если в вашей машинке предусмотрен режим стирки спортивной одежды, то можно выбрать его.
3. Стоит убрать установку на отжимание изделия и рекомендуется установить температуру 30 градусов.
4. Включить стиральную машинку.

Примечание: температура не должна быть выше 40 градусов по Цельсию. И ни в коем случае не рекомендуется отжимать одежду в машинке. Не стоит и замачивать изделия из мембраны.

После стирки в стиральной машине рекомендуется отжать изделие вручную. Это не повредит мембранной ткани. Можно отжимать местами или завернуть изделие в полотенце и потихоньку отжать.

Далее изделие выкладывается на поверхность в горизонтальном положении и сушится. Нужно следить за солнечными лучами. Не нужно чтобы они попадали на изделие. Комната, где сушится одежда, должна регулярно проветриваться. Эти правила относятся и к стирке руками.

Для поддержания хорошего внешнего вида и водоотталкивающих свойств у мембранных тканей требуется следовать этим правилам и регулярно ухаживать за мембраной.

Вас может заинтересовать

Пропитки и средства по уходу за тканями

   Любая водостойкая экипировка или снаряжение нуждаются в специальном уходе. В противном случае, непромокаемая вначале одежда начнет быстро терять свои функции. Сначала потекут швы, за ними и материал — увы, со временем вещи изнашиваются.

    Единственным эффективным решением в такой ситуации будет применение водоотталкивающих пропиток и специальных средств по уходу. ЗА НЕСКОЛЬКО МИНУТ ваша одежда, рюкзак и палатка вновь станут совершенно непромокаемыми! Тем более, что водоотталкивающие пропитки существуют как универсальные, так и специализированные — для одежды из синтетической, смесовой, хлопковой или «дышащей» мембранной ткани.

Никакого чуда тут нет.
Как работают пропитки — подробнее в конце этой страницы >>

В этом разделе все средства собраны вместе. Но для вашего удобства мы еще их разделили по двум признакам:

• по виду изделий (для мембраны, для флиса, софтшела, пуха, для палаток, для обуви)
• по назначению (водооталкивающие пропитки или средства для стирки)

Цвет колпачка имеет значение:

• сиреневый колпачок — водоотталкивающие пропитки. В свою очередь тоже подразделяются на:
  — для обработки в стиральной машине (или в тазике 🙂
  — для обработки спреем
• зеленый колпачок — средства для стирки 

 

 

 

Важная информация по использованию пропиток и средств для стирки Nikwax также в конце этой страницы >>

---

 

О ДОСТАВКЕ: К сожалению, по требованиям перевозчиков к содержанию грузов, мы не можем отправить пропитки (потому что это жидкости) в некоторые регионы. В те, в которые есть только авиа-доставка.
   Приносим свои извинения жителям Калининграда, Магадана, Норильска, Петропавловска-Камчатского, Южно-Сахалинска и Якутска.

Как же работают водооталкивающие пропитки для ткани?

   Пропитка для ткани — это не чудо. Она может придать ткани водооталкивающие свойства, но она не превратит обычную ткань в мембранную, с водостойкостью 10-20 тыс.мм водяного столба.

   Пропитки с водооталкивающими свойствами не повышают физическую водонепроницаемость ткани. Они создают на поверхности ткани несмачиваемый слой, который заставляет воду собираться в капли и стряхиваться с поверхности. Это так называемая обработка Water Repellent (водоотпугивающая 🙂

   Если обработанную ткань испытать на водостойкость на специальном станке (который продавливает ткань водой под прессом), то показатели водостойкости — будут неизменными. Но дождевая вода с такой ткани просто скатывается и ткань не промокает.
   Производители водооталкивающих пропиток уверяют, что пропитки не смываются с изделий даже после 1-2-3-х стирок. Правда, стирать надо не порошком, а специальными средствами.

Как пропитки для мембранных тканей восстанавливают «дышащие» свойства ткани?

   Все очень просто! Пропитка не создает мембранный слой на обычной ткани — пока технологии не развились настолько. Она очищает мембрану, ее «поры». Со временем «поры» мембраны забиваются и она начинает «дышать» хуже. Пропитка или средство для стирки мембранной ткани просто очищает поверхность самой мембраны — и дышащие свойства восстанавливаются.

  Еще один аспект — по физическому смыслу мембраны она работает лучше, когда верхний слой ткани не намок (подробности мы здесь приводить не будем — вы их легко найдете в Интернете).
Но как же быть в дождь?! Ведь намокнет!

   Здесь как раз работает еще одна функция пропиток для мембран — они восстанавливают водооталкивающие свойства верхних тканей. Т.е водооталкивающая обработка нужна не только для того, чтобы повысить водостойкость мембраны — но и для повышения ее паропроницаемости. Вот такой пародокс…

  Цель та же самая — пропитка покроет поверхность мембраны и не даст ее «порам» забиваться. Вещь прослужит дольше…

Для чего нужны специальные средства для стирки мембран и пуха?

   Однажды я решил постирать оранжевую мембранную куртку. Яркий цвет местами сильно запачкался и для повышения эффективности процесса я предварительно замочил ее в обычном стиральном порошке. На несколько часов. Куртка была с подкладкой-сеткой — и через эту сетку хорошо было видно, как мембрана просто отслоилась от основной ткани… А в тазике по поверхности воды плавали мелкие крупинки бывшей мембраны 🙂 Замечу, что куртка была от весьма известного производителя. Т.е. дело было не в качестве мембраны — а в «силе» стирального порошка.

   Этот пример очень хорошо демонстрирует, как воздействуют стиральные порошки на мембрану. Конечно, в моем примере мембрану получилось «угробить» за один заход 🙂 Обычно этот процесс при стирках растянут во времени, но все равно — стиральные порошки — это разрушители мембран!

   Что касается пуха — то специальные средства для его стирки сохраняют упругость пушинок. Пух не сваливается, занимает бОльший объем — а значит пуховка дольше будет такой же теплой, как была после покупки.

---

 

ВАЖНО: ОБ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПРОПИТОК И СРЕДСТВ ДЛЯ СТИРКИ NIKWAX

• пропитки и средства для стирки Nikwax ни в коем случае не должны «встречаться» со следами стирального порошка — это может привести к образованию нерастворимых гранул, которые осядут на одежде. Поэтому тщательно полоскайте вещи. Дозатор стиральной машины необходимо тщательно промыть от стирального порошка.
   
• пропитки и средства для стирки Nikwax ни в коем случае не должны «встречаться» друг с другом. Проводите вы обработку в стиральной машине или вручную — после стирки необходимо очень тщательно прополоскать изделие. «Встреча» водооталкивающей пропитки со средством для стирки Nikwax приводит к тому, что образуется липкая взвесь, оседающая на одежде и внутри стиральной машины тоже. Таких проблем НИКОГДА не возникает, если изделия тщательно полоскать.
   
• при использовании стиральной машины пропитки и средства для стирки Nikwax необходимо заливать через дозатор, но не через отсек для кондиционера. Не рекомендуется заливать их через люк, прямо на вещи — так они хуже перемешиваются с водой.

У нашего покупателя произошел неприятный случай — при обработке водооталкивающей пропиткой TX.DIRECT WASH-IN одежда покрылась липким слоем, который не отстирывается, а надо очищать механически. Это произошло из-за того, что в стиральной машине пропитка TX.DIRECT WASH-IN смешалась со средством для стирки TECH WASH.

• Ни в коем случае нельзя заливать пропитку в отсек для кондиционера в дозаторе стиральной машины!
• Процессы стирки и пропитки нельзя совмещать в одном цикле стиральной машины — их надо разносить во времени: постирать-прополоскать полностью — пропитать — прополоскать.

ОБЯЗАТЕЛЬНО — перед использованием пропитки TX.DIRECT WASH-IN изделие надо тщательно прополоскать от любых моющих средств (как написано в инструкции производителя).

Подробности этой истории можно найти на странице «Отвечаем на ваши вопросы» (потом сделаем отдельную статью).

 

Сергей Лащевский, ПИК-99

Вверх >>

 

Статья «Гуси отдыхают…» (как пользоваться пропитками, как правильно, как неправильно, сайт ski.ru ) >>

 

Как стирать мембранную одежду в стиральной машине: средства

Мембранная ткань отличается высоким водоотталкивающим и грязеотталкивающим эффектом и прекрасно сохраняет тепло.

Одежда из такой ткани легкая, теплая и очень практичная. За счет чего мембрана обладает такими свойствами?

Структура мембранной ткани

Ткань сохраняет тепло за счет уникальной текстуры материала, если посмотреть через лупу можно увидеть мелкие ячейки, которые, при повышении температуры, выпускают теплый воздух, а холодный воздух, наоборот, не пропускают. Получается своеобразный микроклимат для поддержания комфортной температуры человека. Сверху мембрана покрыта невидимой  пленкой и обработана специальным водоотталкивающим средством. Все это позволяет ткани оставаться сухой изнутри.

Тонкости при стирке мембраны

Не мудрено, что изделиям из такой ткани требуется особый уход.

Если загрязнения довольно сильные, грязь еще не высохла, дайте ей подсохнуть и очистите мягкой губкой.

Теперь можно приступить непосредственно к стирке, обычным порошком стирать нельзя, он забьет все «поры» и ткань потеряет свои замечательные свойства.

 Кроме обычного порошка, при стирке мембранной ткани нельзя использовать кондиционер, отбеливатель, хлорсодержащие вещества и другие агрессивные средства.

Поэтому, используем только специальное средство для стирки мембранной одежды, как правило оно жидкое.

В инструкции к средству указано, что можно использовать его и в стиральной машине, но, чтобы сохранить изделие надолго, рекомендуем стирать вручную.

Итак, берем нужное количество средства и действуем по инструкции. Не забудьте надеть перчатки.

Воду, не превышающую 40 градусов, в небольшом количестве наливаем в таз, выливаем туда средство для стирки мембраны, перемешиваем и погружаем в раствор наше изделие. Даем ткани намокнуть, и приступаем к стирке.

 Ни в коем случае не трем, стираем только мнущими движениями.

После чего, тщательно полощем в холодной воде (более трех раз), и без выжимания, вывешиваем стекать над ванной.

Сушить изделие желательно на плоской поверхности, тщательно расправив все складки. В комнате должно быть свежо и прохладно, недопустимо попадание солнечных лучей на одежду. Нельзя сушить на батареях или других отопительных приборах.

После каждой стирки обязательно на мембрану наносится пропитка. Когда изделие высохло, наносим специальный спрей  на чистую и сухую ткань. Затем не смывая, даем впитаться и через два – три часа смело эксплуатируем.

Данная процедура необходима потому, что при стирке старая пропитка смывается.

Если вновь не обработать ткань, она не будет защищать вас так эффективно, как до стирки. Это средство можно купить в любых специализированных магазинах или через интернет. Некоторые поставщики продают средство для стирки и пропитку на разлив. Это удобно, если бюджет ограничен, но экономнее, конечно, купить целую бутылку.

Хозяйственное или детское мыло

Кроме специальных средств для стирки мембранной одежды  можно использовать обычное хозяйственное или детское мыло. Действуем по следующему алгоритму:

• растворяем мыло в воде;
• погружаем одежду в мыльный раствор;
• мягкой губкой протираем в загрязненных местах, без нажима;
• полоскаем и даем стечь воде над ванной, без отжима.

Стирка мембраны в машине автомат

 Большинство изделий из мембраны стирать в машине нельзя, но есть одежда из плотной ткани и данный вид ухода возможен.

Эта информация отражена на бирке, изучите ее внимательно. Если вы приняли решение стирать в машине, учтите такие моменты, как:

При сильных загрязнениях стиральная машина может не справится и изделие нужно будет повторно стирать в ручную.

Какие средства для стирки мембранной одежды можно купить

Вот несколько производителей средств по уходу за мембраной:

• Если вы ранее постирали изделие обычном порошком жидкость Nikwax Tech Wash спасет вас. Она промоет ячейки ткани и они снова «заработают». Кроме того, средство не только прекрасно очистит ткань от загрязнений, но и пропитает ее.

 

• Бальзам DOMAL Sport Fein Fashion тоже неплохо справится с загрязнениями на любой спортивной одежде.

Кроме того, его можно использовать для тканей из полиэстера.

 

• Гель Denkmit Fresh Sensation прекрасно отстирывает, но не содержит водоотталкивающей пропитки.

Цена значительно ниже, чем у других средств.

 

 

• Perwoll — отличное средство для стирки мембранной спортивной одежды и даже для стирки обуви.

 

 

 

• Капсула Ariel тоже эффективно отстирает мембрану, но конечно, она не содержит в себе пропитки.

При хорошем полоскании, производитель гарантирует отсутствие мыльных разводов на одежде.

Уход  и носка одежды из мембраны

Есть еще некоторые рекомендации по уходу за изделиями из мембраны:

• одежду ни в коем случае нельзя гладить, ячейки слипнутся и вещь можно выбросить;
• изделие нужно регулярно обрабатывать водоотталкивающими спреями;
• чтобы предохранить одежду от пыли, храните ее в специальных тканевых или полиэтиленовых мешках в расправленном состоянии.

При носке одежды из мембраны, также существуют некоторые хитрости.

Например, под куртку или комбинезон нужно надевать термобелье и джемпер из специальных материалов (Outlast, Polartec, Windbloc).

Если вы наденете шерстяной свитер или футболку из трикотажа, то при интенсивных нагрузках, организм вспотеет. Мембрана не сможет вывести излишнюю влагу.

Мембранная одежда при правильной носке очень удобна, она легкая, что очень важно для малышей, которым нужно быстро двигаться. Это невозможно в тяжелых ватных и толстых синтепоновых куртках и комбинезонах.  Мембрана не даст промокнуть под дождем, при этом она будет «дышать», испарения будут выходить наружу. Сильного ветра тоже не стоит бояться, мембрана не продувается, когда дует ветер ячейки закрываются и вы чувствуете себя тепло и комфортно.

Конечно вещи из мембраны стоят не дешево, но при правильном уходе они прослужат вам много лет.

 

 

ТОП магазинов стиральных машин и бытовой техники:

• mvideo.ru/- магазин бытовой техники, большой каталог стиральных машин
•  holodilnik.ru – Недорогой магазин бытовой техники.
• techport.ru — выгодный современный интернет магазин бытовой техники
• citilink.ru — современный интернет магазин бытовой техники и электроники, дешевле офлайн магазинов!
• ru.aliexpress.com— запчасти для стиральных машин

детергентов для лизиса клеток и экстракции белков | Thermo Fisher Scientific

Детергенты — это класс молекул, уникальные свойства которых позволяют манипулировать (нарушать или формировать) гидрофобно-гидрофильными взаимодействиями между молекулами в биологических образцах. В биологических исследованиях детергенты используются для лизиса клеток (высвобождения растворимых белков), солюбилизации мембранных белков и липидов, контроля кристаллизации белков, предотвращения неспецифического связывания в процедурах аффинной очистки и иммуноанализа, а также используются в качестве добавок при электрофорезе.

---

Свойства и виды моющих средств

Состав ПАВ. Обобщенная структура отдельной молекулы детергента (вверху) и полная структура CHAPS (внизу), пример цвиттерионного детергента.

Химическое определение моющего средства

Детергенты представляют собой амфипатические молекулы, что означает, что они содержат как неполярный «хвост», имеющий алифатический или ароматический характер, так и полярную «голову».Ионный характер группы полярных голов лежит в основе широкой классификации моющих средств; они могут быть ионными (заряженными, анионными или катионными), неионными (незаряженными) или цвиттерионными (имеющими как положительно, так и отрицательно заряженные группы, но с нулевым суммарным зарядом).

---

Подобно компонентам биологических мембран, детергенты обладают гидрофобно-связывающими свойствами в результате их неполярных хвостовых групп.Тем не менее, моющие средства сами по себе растворимы в воде. Следовательно, молекулы детергента позволяют диспергировать (смешивать) нерастворимые в воде гидрофобные соединения в водной среде, включая экстракцию и солюбилизацию мембранных белков.

Детергенты при низкой концентрации в водном растворе образуют монослой на границе раздела воздух – жидкость. При более высоких концентрациях мономеры детергента объединяются в структуры, называемые мицеллами. Мицелла представляет собой термодинамически стабильный коллоидный агрегат мономеров детергента, в котором неполярные концы изолированы внутрь, избегая воздействия воды, а полярные концы ориентированы наружу при контакте с водой.

Идеализированная структура мицеллы детергента.

---

Как количество мономеров детергента на мицеллу (число агрегации), так и диапазон концентраций детергента, выше которого образуются мицеллы (так называемая критическая концентрация мицелл, CMC), являются свойствами, специфичными для каждого конкретного детергента (см. Таблицу).Критическая температура мицелл (CMT) — это самая низкая температура, при которой мицеллы могут образовываться. CMT соответствует так называемой температуре помутнения, поскольку мицеллы детергента образуют кристаллические суспензии при температурах ниже CMT и снова становятся прозрачными при температурах выше CMT.

На свойства моющего средства влияют такие экспериментальные условия, как концентрация, температура, pH буферного раствора и ионная сила, а также наличие различных добавок. Например, CMC некоторых неионных детергентов уменьшается с повышением температуры, в то время как CMC ионных детергентов уменьшается с добавлением противоиона в результате уменьшения электростатического отталкивания между заряженными головными группами. В других случаях добавки, такие как мочевина, эффективно нарушают структуру воды и вызывают снижение содержания КМЦ моющего средства. Как правило, с увеличением ионной силы происходит резкое увеличение числа агрегаций.

Детергенты могут быть денатурирующими или неденатурирующими по отношению к структуре белка. Денатурирующие детергенты могут быть анионными, такими как додецилсульфат натрия (SDS), или катионными, такими как бромид этилтриметиламмония. Эти детергенты полностью разрушают мембраны и денатурируют белки, нарушая межбелковые взаимодействия.Неденатурирующие детергенты можно разделить на неионные детергенты, такие как Triton X-100, соли желчных кислот, такие как холат, и цвиттерионные детергенты, такие как CHAPS.

Свойства обычных моющих средств.

Моющее средство	Тип	Агг. № ‡	МВт моно (мицелла)	CMC мМ (% мас. / Об.)	Облако точка ° C	Dialyzable
Thermo Scientific Triton X-100	Неионный	140	647 (90 КБ)	0.24 (0,0155)	64	Нет
Thermo Scientific Triton X-114	Неионный	–	537 (-)	0,21 (0,0113)	23	Нет
НП-40	Неионный	149	617 (90 КБ)	0,29 (0,0179)	80	Нет
Thermo Scientific Brij-35	Неионный	40	1225 (49 КБ)	0.09 (0,0110)	> 100	Нет
Thermo Scientific Brij-58	Неионный	70	1120 (82 КБ)	0,08 (0,0086)	> 100	Нет
Thermo Scientific Tween 20	Неионный	–	1228 (-)	0,06 (0,0074)	95	Нет
Thermo Scientific Tween 80	Неионный	60	1310 (76 КБ)	0. 01 (0,0016)	–	Нет
Октил глюкозид	Неионный	27	292 (8 КБ)	23-24 (~ 0,70)	> 100	Есть
Октилтиоглюкозид	Неионный	–	308 (-)	9 (0,2772)	> 100	Есть
SDS	Анионный	62	288 (18K)	6-8 (0.17-0,23)	> 100	Нет
ЧАПС	Цвиттерионный	10	615 (6 КБ)	8-10 (0,5-0,6)	> 100	Есть
ЧАПСО	Цвиттерионный	11	631 (7K)	8-10 (~ 0,505)	90	Есть

‡ Агг.# = Число агрегации, которое представляет собой количество молекул на мицеллу.

---

Очищенные моющие растворы

Хотя моющие средства доступны из нескольких коммерческих источников и обычно используются во многих исследовательских лабораториях, важность чистоты и стабильности моющих средств не получила широкого признания.Моющие средства часто содержат следы примесей, полученных при их производстве. Некоторые из этих примесей, особенно пероксиды, которые содержатся в большинстве неионных моющих средств, нарушают активность белка. Кроме того, некоторые типы моющих средств легко окисляются под воздействием воздуха или ультрафиолетового излучения, что приводит к потере их свойств и активности в качестве солюбилизирующих агентов. Мы предлагаем несколько моющих средств высокой чистоты с низким содержанием пероксидов, которые расфасовываются под азотом в прозрачные стеклянные ампулы. Эти моющие растворы Thermo Scientific Surfact-Amps обеспечивают непревзойденное удобство, качество и постоянство всех видов моющих средств.Набор пробоотборника включает 10 различных очищенных моющих средств (семь в формате Surfact-Amps и три в твердом виде).

---

Структура клеточной мембраны, солюбилизация белков и детергенты

Строение клеточных мембран

Основным фактором, определяющим поведение и взаимодействие молекул в биологических образцах, является их гидрофильность или гидрофобность.Большинство белков и других молекул с заряженными или полярными функциональными группами растворимы (или смешиваются) в воде, поскольку они участвуют в высокоупорядоченной межмолекулярной структуре воды с водородными связями. Некоторые другие белки (или, по крайней мере, части белков), а также жиры и липиды не имеют полярных или заряженных функциональных групп; следовательно, они исключены из упорядоченного взаимодействия воды с другими полярными молекулами и имеют тенденцию объединяться в структуры, имеющие минимальную площадь контакта с полярным окружением.Эта ассоциация неполярных молекул в водных растворах обычно называется гидрофобным притяжением, хотя более точно ее следует понимать как исключение из гидрофильной среды.

Образование и стабильность биологических мембран в значительной степени является результатом гидрофобного притяжения фосфолипидов, которые образуют двухслойные листы, имеющие гидрофобные липидные «хвосты», ориентированные в пределах толщины листа, и полярные «головные» группы, ориентированные на внешнюю и внутреннюю водную среду. Мембранные белки полностью покрывают толщину мембраны или встроены с одной стороны мембраны в соответствии с их структурой гидрофобных и гидрофильных боковых цепей аминокислот и других функциональных групп.

Разрушение мембраны, связывание с белками и солюбилизация

Как правило, умеренные концентрации слабых (т.е., неионогенные) детергенты нарушают целостность клеточных мембран, тем самым облегчая лизис клеток и экстракцию растворимого белка, часто в нативной форме. При определенных буферных условиях различные детергенты эффективно проникают между бислоями мембраны в концентрациях, достаточных для образования смешанных мицелл с изолированными фосфолипидами и мембранными белками.

Лизис клеток на основе детергентов. Для процедур экстракции белков можно использовать как денатурирующие, так и неденатурирующие реагенты для лизиса клеток.

---

Денатурирующие детергенты, такие как SDS, связываются как с мембранными (гидрофобными), так и с немембранными (водорастворимыми, гидрофильными) белками при концентрациях ниже КМЦ (т. Е. В виде мономеров). Реакция является равновесной до насыщения. Следовательно, свободная концентрация мономеров определяет концентрацию детергента.Связывание SDS является кооперативным (т.е. связывание одной молекулы SDS увеличивает вероятность связывания другой молекулы SDS с этим белком) и превращает большинство белков в жесткие стержни, длина которых пропорциональна молекулярной массе.

Неденатурирующие детергенты, такие как Triton X-100, имеют жесткие и объемные неполярные головки, которые не проникают в водорастворимые белки; следовательно, они обычно не нарушают нативных взаимодействий и структур водорастворимых белков и не обладают свойствами кооперативного связывания.Основной эффект неденатурирующих детергентов — связываться с гидрофобными частями мембранных белков, тем самым придавая им смешиваемость.

При концентрациях ниже CMC мономеры детергентов связываются с водорастворимыми белками. Выше CMC связывание детергента с белками конкурирует с самоассоциацией молекул детергента в мицеллы. Следовательно, при увеличении концентрации детергента сверх КМЦ увеличение количества мономеров детергента, связанных с белком, не происходит.

Мономеры детергентов солюбилизируют мембранные белки, разделяясь на бислой мембраны. С увеличением количества моющих средств мембраны проходят различные стадии солюбилизации. Начальная стадия — лизис или разрыв оболочки. При молярном соотношении детергент: мембранный липид от 0,1: 1 до 1: 1 липидный бислой обычно остается неповрежденным, но происходит избирательная экстракция некоторых мембранных белков. При увеличении соотношения до 2: 1 происходит солюбилизация мембраны, в результате чего образуются смешанные мицеллы.К ним относятся мицеллы фосфолипид-детергент, мицеллы детергент-белок и мицеллы липид-детергент-белок. При соотношении 10: 1 все взаимодействия липид: белок нативной мембраны эффективно заменяются на взаимодействия детергент: белок.

Количество детергента, необходимое для оптимальной экстракции белка, зависит от CMC, числа агрегации, температуры и природы мембраны и детергента. Буфер для солюбилизации должен содержать достаточное количество детергента, чтобы обеспечить более 1 мицеллы на молекулу мембранного белка, чтобы гарантировать, что отдельные молекулы белка изолированы в отдельные мицеллы.

Моющие средства, используемые для лизиса клеток. Основные характеристики денатурирующих и неденатурирующих детергентов, используемых для экстракции белков.

---

Методы удаления моющих средств

Удаление детергента из солюбилизированных белков

Каким бы необходимым и полезным ни было использование детергента для начального лизиса клеток или экстракции мембранных белков, последующие применения или эксперименты с экстрагированными белками могут потребовать удаления части или всего детергента.Например, хотя многие водорастворимые белки функциональны в форме, солюбилизированной детергентом, мембранные белки часто модифицируются и инактивируются солюбилизацией детергента в результате нарушения взаимодействия природных липидов. В некоторых таких случаях функция мембранных белков восстанавливается, когда они восстанавливаются в двухслойные мембраны путем замены детергента фосфолипидами или другими мембраноподобными липидными смесями.

Функцию отдельного белка можно изучить изолированно, если его сначала очистить, а затем воссоздать в искусственной мембране (хотя восстановление нативной ориентации в мембране является серьезной проблемой).Даже если восстановление функции белка не является проблемой, может потребоваться уменьшить концентрацию детергента в образце, чтобы сделать его совместимым с анализами белков или гель-электрофорезом.

Удалить моющее средство можно разными способами. Диализ эффективен для удаления детергентов с очень высокими КМЦ и / или небольшими числами агрегации, таких как N-октилглюкозиды. Детергенты с низким содержанием CMC и большим числом агрегации не могут быть подвергнуты диализу, поскольку большинство молекул детергента будут находиться в мицеллах, которые слишком велики, чтобы диффундировать через поры диализной мембраны; только избыток мономера может быть подвергнут диализу.Ионообменная хроматография с использованием подходящих условий для избирательного связывания и элюирования представляющих интерес белков является еще одним эффективным способом удаления детергента. Также можно использовать разделение градиентом плотности сахарозы.

Посмотрите это видео, чтобы узнать больше о диализе протеина

---

Рекомендуемая литература

1. Walker JM (2009) Справочник протоколов протеина.Третье издание. Нью-Йорк (Нью-Йорк): Springer-Verlag New York, LLC.

Моющее средство — обзор | Темы ScienceDirect

3.10.1 Моющие средства

Моющие средства представляют собой амфифильные молекулы, поскольку они содержат гидрофобные и гидрофильные части в своей структуре. Гидрофобная группа обычно состоит из углеводородного хвоста, в то время как гидрофильная часть имеет полярную головку. В водной среде детергенты, если они были добавлены в соответствующих концентрациях, способны образовывать мицеллы.Концентрация, допускающая образование мицелл в водном растворе, называется КМЦ (критическая концентрация мицелл) и является важным фактором во время солюбилизации белка. Слишком низкая концентрация детергента приведет к плохому восстановлению мембранных белков. С другой стороны, слишком высокая концентрация может повлиять на качество конечных результатов, поскольку удаление избытка детергента затруднено и может привести к непредсказуемой потере белка из образца. Концентрация детергента, близкая к CMC, может быть определена эмпирически с помощью физических измерений, например поверхностного натяжения, или химическими методами.Наиболее удобный метод — добавление красителей, меняющих цвет при образовании мицелл.

Моющие средства можно разделить на три основные группы: неионные, ионные и цвиттерионные. Растворенные в воде неионные моющие средства не заряжаются в зоне гидрофильной головки. Они особенно эффективны при нарушении взаимодействий между липидами или липидами и белками, в отличие от их неспособности нарушать межбелковые взаимодействия. Типичными представителями этой группы являются тритоны (X-100, X-114), BRIJ, SPAN, MEGA, NP-40 или подростки.Ионные моющие средства при растворении в водных растворах обладают стабильным зарядом, расположенным на гидрофильной части. Типичным представителем этой группы является додецилсульфат натрия (SDS), одно из наиболее широко используемых в лабораториях моющих средств благодаря своим свойствам. Подобно другим ионным детергентам, связывание SDS с белками дополняет их множественными отрицательными зарядами, которые маскируют нативные заряды аминокислотных остатков. Это причина рутинного использования электрофореза в SDS-PAGE. Другими известными детергентами этой группы являются дезоксихолевая кислота, саркозил (лауроилсаркозинат натрия) и другие.Последняя группа, цвиттерионные детергенты, — это вещества, одновременно обладающие положительным и отрицательным зарядом, но их суммарный заряд равен нулю. Цвиттерионные детергенты не изменяют свой заряд при растворении белков. Они также более полезны для солюбилизации белков, чем неионные детергенты, в основном из-за ингибирования агрегации белок-белок. По своим свойствам цвиттерионные детергенты используются при изоэлектрофокусировании или в 2D-электрофорезе. Типичными представителями этой группы являются: ЧАПС, ЧАПСО и сульфобетаины.

Еще одним важным фактором моющих средств является так называемая «точка помутнения» (ТП). Это явление зависит от температуры среды, в которой растворено моющее средство. CP в основном наблюдается для неионных детергентов, но другие (например, SDS, CHAPSO) также имеют свои собственные точки помутнения при более высоких температурах, обычно близких к 90–100 ° C (очистка мембранных или цитозольных белков). Название явления происходит от «облаков», образующихся в растворе моющего средства после достижения его температуры помутнения (CPT).Раствор разделяется на две фазы: (1) водная часть, в основном содержащая растворенные в воде белки; и (2) «мутная» часть, содержащая детергент с гидрофобными белками. Такая негомогенная смесь может быть легко разделена, что позволяет легко разделить солюбилизированные белки на гидрофильные и гидрофобные. Некоторые моющие средства имеют относительно низкую температуру помутнения, например Triton X-114 (23 ° C), что позволяет применять их в повседневных лабораторных целях. Здесь следует четко указать, что детергенты могут значительно повлиять на протеолитическое расщепление и измерения МС.Поэтому удаление этих агентов часто является обязательным перед дальнейшим анализом.

Важно отметить, что детергенты могут работать не только в водных растворах, но и в органических растворителях, где они также могут образовывать мицеллы, но полярные «головки» молекул детергента расположены внутри мицеллы, в то время как гидрофобные «Хвосты» направлены к растворителю, что обеспечивает более широкое применение детергентов в различных экспериментах, включая протеомику.

Моющие средства могут вызвать дополнительные аналитические проблемы из-за своих физико-химических свойств.Обычно они склонны к вспениванию при смешивании или перемешивании. Как упоминалось выше, они также могут приводить к нарушению масс-спектров или потере чувствительности, или они могут влиять на разделения ВЭЖХ за счет неспецифических взаимодействий с неподвижной фазой колонки. Удаление моющего средства кажется сложной задачей, что приводит к потере белка во время процесса. Для удаления моющих средств используется осаждение с помощью ацетона или подобных растворителей, но из-за их низкого содержания часто применяется обращенная фаза (например, одноразовые картриджи).В настоящее время на рынке также доступны высокоэффективные наборы для удаления моющих средств.

Мембранные белки, липиды и детергенты: не просто мыльная опера

Abstract

Изучение мембранных белков представляет собой серьезную проблему в биохимии белков, причем одной из основных трудностей является проблема, возникающая при работе за пределами естественной липидной среды. Исследования in vitro, такие как кристаллизация, зависят от успешной солюбилизации или восстановления мембранных белков, что обычно включает тщательный выбор солюбилизирующих детергентов и смешанных систем липид / детергент.Этот обзор будет сосредоточен на методах, доступных в настоящее время для эффективного восстановления и солюбилизации мембранных белков с помощью мицелл детергентов, смешанных липидных / детергентных мицелл и бицелл или липосом. Мы фокусируемся на соответствующих молекулярных свойствах детергентов и липидов, которые помогают понять эти процессы. Существенным препятствием для исследований мембранного белка является сохранение стабильности и функции белка во время солюбилизации, восстановления и кристаллизации.Мы выделяем некоторые уроки, извлеченные из исследований сворачивания мембранных белков in vitro, и даем обзор роли, которую липиды могут играть в стабилизации белков.

Аббревиатуры

LCHII

светособирающий комплекс

DAGK

диацилглицерин киназа

SDS

додецилсульфат натрия

OG

n -октил-β-d-глюкопиранозид

DDMцил-бета-d-глюкопиранозид

DDAO-

56-

DDMцил

56-

DDAO-dAO-мальзид

56 -9035

додецилдиметил- N -аминоксид

DMPC

1,2-димиристоил- sn -глицеро-3-фосфохолин

CHAPS

3 — [(3-холамидопропил) диметиламмонио] -1-пропаноглосульфонат Dimethylammonio] -1-пропансульфонил

D-

-диосульфонил

дигалактозилдиацилглицерин

DPPG

l-α-дипальмитоилфосфатидилхолин

DOPG

l-α-диолеоилфосфатидилглицерин

DOPC

l-α-1,2-DHleylphospatidylcholine E-

dylcholine α-

dylcholine α-

dylcholine 1,2-дигексаноилфосфатидилхолин

POPC

1-пальмитоил-2-олеоилфосфатидилхолин

CHAPSO

3 — [(3-холамидопропил) диметиламмонио] -2-гидроксил-1-пропансульфонат 9035A

E

coli белок A внешней мембраны

OmpF

E. coli белок внешней мембраны F

Ключевые слова

Мембранные белки

Липид

Детергент

Бактериородопсин

Восстановление статей

Реферат

Авторские права © 2004 Издано Elsevier BV

Рекомендуемые статьи

Цитирование статей

The Peptidisc, простой метод стабилизации мембранных белков в растворе без детергентов

[Примечание редакции: ответы автора на первый раунд рецензирования приводятся ниже.]

Рецензент № 1:

[…] 1) Используемые белки представляют собой относительно крупные мембранные белковые комплексы или белки b-бочонка, которые стабильны даже в мицеллах детергента. Для этих мембранных белков хорошей альтернативой будет пептидиск. Однако для мембранных белков, которые нестабильны в мицеллах детергента, экспрессируются бесклеточно или ресолюбилизируются из телец включения, неясно, могут ли они быть стабилизированы этими дисками. GPCR или транспортер были бы хорошей альтернативой.

Мы согласны с рецензентом, пептидиск, как и другие имитаторы, не будет работать с белками, которые трудно очистить или которые слишком нестабильны в моющем средстве. Однако в случае комплекса BRC мы наблюдаем 100-кратное увеличение стабильности пептидного детергента по сравнению с детергентом LDAO при повышенной температуре. Ближайшая цель нашей работы — представить пептидиск как новый инструмент, чтобы другие исследователи могли его протестировать на их любимой мишени. Например, текущая биохимическая работа над GPCRs включает амфиполы, а не столько нанодиски, возможно, из-за необходимого добавления экзогенных липидов, которые затрудняют восстановление.Таким образом, пептидиск также может заменить амфиполы, которые по своей природе являются полидисперсными. Дальнейшие исследования, характеризующие полезность пептидиска для бесклеточных систем экспрессии, безусловно, представляют интерес, однако выходящие за рамки этой вводной статьи. Мы считаем, что бесклеточная экспрессия должна быть исследована как отдельное исследование со всеми различными возможными мембранными миметиками (нанодиски / SMA / пептергенты и т. Д.), Чтобы быть действительно полезными.

2) Одно из преимуществ перед нанодисками, которое рекламируют авторы, состоит в том, что пептидиски можно использовать для структурных исследований.Было бы хорошо показать, например, спектр ЯМР мембранного белка в таком пептидиске и показать, что это преимущества по сравнению с нанодисками большего размера.

Мы только упомянули, что пептидиски, учитывая их однородность по составу, должны быть полезны для структурных исследований. Однако наша лаборатория не оборудована для такого структурного анализа, но мы активно ищем сотрудников.

Рецензент № 2:

Рукопись Карлсона и др.включает в себя значительный объем данных о пяти различных мембранных белках, солюбилизированных в двухспиральные пептиды. Это сочетается с тремя методами восстановления для переноса белков на пептидисках на колонках, шариках или гелях. Таким образом, он потенциально обеспечивает полезный методологический прогресс и эталон в быстро развивающейся области подготовки и анализа мембранных белков на дисках нанометрового размера. Однако есть преувеличения и неясность ключевых моментов, которые необходимо рассмотреть.

В аннотации говорится, что «пептидиск просто требует короткого амфипатического бипирального пептида (NSP) и никаких дополнительных липидов». Однако изначально белки получают с использованием детергентов и экспрессируются в E. coli. Следовательно, рекомбинантная экспрессия, например, в Также необходимы кишечная палочка и детергент.

Чтобы предотвратить дальнейшую путаницу, мы изменили это утверждение на «Восстановление мембранного белка, солюбилизированного детергентом, в пептидиск требует лишь короткого промежутка времени»,

Авторы продолжают говорить, что «Этот недостаток побудил исследователей разработать альтернативы без детергентов, такие как амфиполы, [Popot, 2010] SMALP, [Lee et al. , 2016] сапозин-липочастицы [Frauenfeld et al., 2016] и популярная система нанодисков [Bayburt, Grinkova and Sligar, 2004; Денисов и др., 2004] «Опять же, некоторые из этих методов также требуют добавления детергента. Это различие требует уточнения.

Мы ввели новый раздел во Введении, чтобы представить и объяснить основные различия между синтетическими каркасами и другими альтернативами, не содержащими моющих средств.

Утверждение «Мы представляем здесь пептидиск как простой метод сборки для поддержки мембранного белка в растворе без детергента» аналогичным образом нуждается в корректировке, поскольку неясно, являются ли эти методы простыми или не содержащими детергентов.

Это и то, и другое. Мы перефразировали это утверждение.

Заключительное утверждение во Введении о том, что «мы показываем, что пептид NSP вполне может быть универсальным каркасом для стабилизации как α-спиральных, так и β-цилиндрических мембранных белков различного размера, топологии и сложности», и после обсуждения, что «Эти преимущества в совокупности предполагают, что пептидиск должен уменьшить проблемы, связанные с биохимическими, структурными и фармакологическими характеристиками мембранных белков, что делает пептидиск эффективным и, возможно, универсальным инструментом для стабилизации этих белков в растворе, не содержащем мембран и детергентов ».Чтобы эта статья была полезной, авторам необходимо указать ограничения метода.

Первоначальное обсуждение было очень коротким, потому что мы изначально представили этот документ как метод. Теперь мы полностью пересмотрели обсуждение, чтобы выделить плюсы и минусы различных каркасов, а также то, где другие методы могут быть более подходящими. Мы также увеличили введение, чтобы представить эти другие методы и то, почему пептидиск явно превосходит некоторые конкретные аспекты.

В материалах и методах, используемых для восстановления пептидисков на колонке, используются такие детергенты, как LDAO. Не денатурирует ли сам пептид в таких детергентах, и не ограничивает ли это эффективность этого реагента?

Восстановление в пептидиске, как и в нанодиске, происходит при разбавлении детергента. Это разрушает мицеллу, позволяя пептиду складываться вокруг целевых белков. Развертывание пептида не является проблемой. Наши данные показывают, что LDAO не ограничивает эффективность метода.

Выход, чистота и активность должны быть даны количественно для каждого белка в пептидиске по сравнению с одним детергентом, а в идеале также по сравнению с липосомами. Это позволит объективно сравнить методы. Не требуют ли предлагаемые методы детергента, который может удалить природно связанные липиды и дестабилизировать мембранные белки? Разве это не ограничение?

Мы провели параллельное сравнение комплекса BRC, восстановленного в липосомах, нанодисках, пептидисках, полимере SMA и детергенте LDAO, и представили результаты в отредактированной рукописи.Все мембранные миметические системы демонстрируют аналогичное повышение термостабильности. Делипидация — это общая проблема солюбилизации детергента. Однако мы показываем, что пептид увеличивает термостабильность делипидированного комплекса BRC. Вероятно, это связано с i) удалением денатурирующих детергентов и ii) более стабильной гидрофобной средой по сравнению с мицеллой детергента. Таким образом, даже без дополнительных липидов пептидиск способен стабилизировать BRC в такой же степени, как и в протеолипосомах (рисунок 10 — рисунок в приложении 1).Делипидирование с помощью детергентов также может быть полезным для повышения чистоты мембранных белков. Например, во время очистки FhuA внутренняя мембрана сначала удаляется путем солюбилизации в Triton X-100 перед добавлением LDAO для высвобождения FhuA из внешней мембраны. Это значительно увеличивает конечную чистоту.

В идеале анализы следует проводить в определенном температурном диапазоне, чтобы гарантировать измерение активности свернутого белка.

Мы показали, что MalFGK ₂ в пептидиске остается свернутым на протяжении всего восстановления с использованием анализов активности BN-PAGE и АТФазы.

Идентичность связанных липидов также должна быть указана, а не неспецифические утверждения о содержании липидов, например: «Кроме того, поскольку липиды (т. Е. Кольцевые липиды) могут оставаться прочно связанными с мембранными белками во время очистки [Bechara et al., 2015], мы также определяли содержание липидов методами тонкослойной хроматографии и фотоколориметрии »и« Следуя тому же подходу, который применялся к MalFGK ₂ выше, мы количественно оценили отдельные пептидные и липидные компоненты пептидиска FhuA (рис. 3B и A), в результате чего получили среднее 8 ± 3 фосфолипидов и 10 ± 2 NSP на пептидиск FhuA ».Низкое количество присутствующих липидных молекул (4 и 8 в случае BRC и FhuA) указывает на то, что в пептидиске остаются только наиболее прочно связанные липиды, и что нельзя предполагать форму диска.

Мы включили данные об идентичности связанных липидов с MalFGK ₂ . Мы также показываем, что FhuA и BRC имеют очень низкое содержание липидов. Однако мы не согласны с тем, что это исключает форму диска, так как периплазматическая и цитоплазматическая стороны FhuA все еще доступны для его растворимых партнеров по связыванию.Следовательно, основная масса пептида должна располагаться вокруг трансмембранных доменов переносчика. Это подтверждают данные электронной микроскопии, включенные в рукопись. Мы расширили обсуждение, чтобы описать возможный способ ассоциации пептида с белком-мишенью.

Присутствие явно нефизиологического мультимера (Sec (EYG) n) на Рисунке 2D замаскировано. Это необходимо объяснить, поскольку это указывает на то, что использование NSP ведет к потенциально артефактическим многомерным состояниям.

Об олигомерной предрасположенности SecEYG сообщалось в прошлом многими исследователями. Это не артефакт, и мы упоминали об этом в рукописи. Наши данные показывают, что пептидиск может захватывать эти олигомеры.

На рис. 2F, почему белки с разной молекулярной массой имеют один и тот же RR50? Неужели нельзя было ожидать увидеть большее количество пептидов, взаимодействующих с большей сборкой или с другими мембранами или типами клеток? Авторы не объяснили свою точку зрения на это, и неясно, как это было оптимизировано, несмотря на то, что это значительная стоимость и определяющий фактор успеха метода.Рекомендуемая молярная концентрация пептида для восстановления должна быть указана и обоснована.

Мы обсудили этот момент более подробно в Обсуждении и предлагаем наклонную конформацию пептида для объяснения этого интересного наблюдения. Мы также включили рекомендуемую молярную концентрацию пептида, которая подтверждается экспериментами по восстановлению в геле.

Описание пептида как пояса вокруг белка и дискообразной формы пептидисков должно быть подтверждено экспериментальными данными и / или ссылками.

Теперь у нас есть расширенное обсуждение возможных ориентаций пептида в Обсуждении. Форма диска четко видна в наших экспериментах с отрицательным окрашиванием.

Имеется один набор данных EM отрицательного окрашивания MalFGK ₂ на пептидисках, показывающий наличие ряда пар и триплетов дисков. Разве это не значимо и не указывает на взаимодействие диска с диском, возможно, опосредованное пептидами NSP? Если да, то не следует ли использовать более низкие концентрации пептидов для минимизации таких сумм в биофизических анализах?

Препарат пептидиск MalFGK ₂ является монодисперсным, см. Отрицательный анализ окраски, рис. 1C.Нам неясно, где обозреватель видит стопку дисков?

Кроме того, масштабная линейка на нижней панели рисунка 1С, по-видимому, указывает 50 (а не 5) Å . Если так, то это непоследовательно.

На рис. 2С показано среднее значение класса одного нанодиска. 10 Å = 1 нанометр. Диск, содержащий MalFGK ₂ , имеет диаметр примерно 11-12 нм. Таким образом, масштабная линейка верна и соответствует указанным в тексте измерениям.

Рецензент № 3:

[…] Рукопись кажется убедительной в отношении биофизических анализов комплексов пептидиск и их содержания пептидов NSP и кольцевых липидов.Тем не менее, я немного скептически отношусь к тому, что пептидиск представляет собой реконструкцию в классическом смысле, потому что пептиды NSP напрямую взаимодействуют с трансмембранными спиралями (управляемыми гидрофобными белок-белковыми взаимодействиями, опосредованными боковыми цепями аминокислот), а не липидами через их алифатические жировые кислотные цепи. Тем не менее, этот метод (хотя и не является новой концепцией, как описано ниже) кажется довольно простым и универсальным в применении.

1) Взаимодействие — мы включили полное обсуждение возможного способа взаимодействия пептида с целевым мембранным белком.Важно отметить, что мы показываем, что пептидиск представляет собой «истинное» воссоздание, потому что он полностью стабилен после удаления излишка пептида, почти так же, как нанодиск или амфиполы. Это контрастирует с другими пептидными каркасами (липопептидами и пептергенами), которые должны поддерживаться в буфере выше их КМЦ для поддержания растворимости белка.

2) Новизна — мы тщательно рассмотрели вопрос новизны в разделе «Введение» и «Обсуждение», включив сравнения (за и против) с другими пептидными каркасами, белковыми каркасами и синтетическими каркасами.Хотя концепция захвата мембранных белков каркасом не нова, нам не известны другие отчеты, показывающие функциональное термостабильное восстановление белка в пептидисках.

1) Как потенциальный будущий пользователь (и нынешний пользователь метода нанодисков) очень важно знать, насколько дорогим является синтез (или любой альтернативный препарат) пептида NSP. Я предполагаю, что он дороже, чем моющие средства, но в отличие от белка MSP, используемого для нанодисков, он может быть дешевле.В том же духе авторы заявили, что чистота их химически синтезированного пептида NSP составляла «более 80%». Этого достаточно? Какие примеси. Связана ли эта довольно низкая чистота с ценой синтеза?

Даже пептиды низкой чистоты по-прежнему «чище» по сравнению с другими каркасами мембранных белков MSP, которые загрязнены липидами и другими белками из-за экспрессии рекомбинантных клеточных белков (основная проблема для биотехнологической промышленности при создании антител против мембранных белков, стабилизированных на нанодисках) .В пептидиске основная масса «примесей» состоит из NSP _r , в котором отсутствует его последняя аминокислота (аспартат) во время синтеза. По сравнению с белком MSP, указанным в Sigma Aldrich, этот пептид дешевле. Мы включили комментарии по этим вопросам в Обсуждение.

2) Насколько пептидиски подвержены агрегации? Авторы предполагают, что пептиды NSP образуют регулярный пояс вокруг мембранного белка, похожий на пояс MSP. Но реально ли это? Ясно, что пептиды расположены так, что гидрофобные части мембранного белка покрываются его гидрофобной стороной, в то время как гидрофильная сторона пептидов остается открытой для растворителя.Но этот процесс, вероятно, будет стохастическим в том смысле, что остаются гидрофобные промежутки на поверхности мембранного белка, а также на некоторых не идеально размещенных пептидах NSP. Эти оставшиеся гидрофобные поверхности затем будут служить точками зародышеобразования для агрегации белка. Оставшиеся молекулы детергента, возникающие в результате солюбилизации и очистки мембранного белка, могут защищать эти оставшиеся гидрофобные поверхности.

Этот рецензент поднимает очень важные и фундаментальные вопросы, и те же самые вопросы относятся также к полимерным системам на основе нанодисков и SMA.Согласно нашим экспериментам, детергент, по-видимому, полностью исключен из пептидиска, поскольку характерные эффекты среды детергента на активность и стабильность белка не наблюдаются после того, как белок переносится в пептидиск. Экспериментальные данные показывают, что агрегации не происходит, и система очень устойчива в водном растворе. Мы также пересмотрели обсуждение, чтобы прояснить, как пептид может ориентироваться вокруг мембранного белка в пептидиске, чтобы учесть проблему открытых алкильных цепей.

3) В связи с вышеприведенным комментарием: содержат ли пептидиски детергенты? Хорошо известно, что количественная замена моющего средства — задача нетривиальная. Часто исходный детергент, используемый для солюбилизации мембранного белка, до некоторой степени остается. Авторам необходимо показать, остались ли в пептидисках какие-то детергенты (рядом с кольцевыми липидами и пептидом NSP).

Исходя из высокой степени корреляции между рассчитанными нами и наблюдаемыми массами пептидисков, вероятно, что большая часть, если не весь детергент удаляется из пептидиска.Кроме того, во всех случаях замены детергента на пептидис наблюдаются значительные изменения ферментативной активности или термостабильности, что позволяет предположить, что даже если остается небольшое количество детергента, денатурирующий эффект среды детергента не сохраняется. Мы обсудили этот момент в расширенном тексте.

4) Насколько большой ремень NSP по сравнению с ремнями для моющих средств разных размеров? Этот вопрос очень актуален для кристаллизации мембранных белков. Пептидиск кажется более компактным, чем нанодиск, и мембранные белки в пептидисках могут кристаллизоваться.Пытались ли авторы кристаллизовать свои пять мембранных белков, использованных в этом исследовании, для которых существуют кристаллические структуры с высоким разрешением (определенные в детергенте)?

Мы также очень рады возможности получить кристаллы! Испытания кристаллов продолжаются, и на основании ЭМ-сравнений MalFGK ₂ мы также считаем, что пептидиск более компактный, чем нанодиск. Однако оптимизация кристаллов и использование пептидиска для исследований кристаллизации выходят за рамки данной статьи.

5) Действительно ли пептидиск имитирует естественную среду мембранного белка? Авторы тщательно выяснили, что пептидиск содержит кольцевые липиды. Однако кольцевые липиды также содержатся в очищенных детергентом образцах. Авторы должны решить этот вопрос, сравнивая содержание кольцевых липидов бок о бок и с течением времени, используя один и тот же транспортер, очищенный как в детергенте, так и в пептидисках, и измеряя с помощью масс-спектрометрии массу (или потерю массы с течением времени) весь комплекс.

Этот вопрос относится и ко всем другим системам мембранных каркасов. Пептидиск явно более щадящая среда, чем мицелла детергента. Сравнение BRC, восстановленного в SMA, нанодисках, пептидисках и протеолипосомах, показывает, что все эти мембранные миметики приводят к сопоставимому увеличению термостабильности белка. Однако пептидиск также сохраняет способность белка связывать поверхностные лиганды, как показано в рукописи, с FhuA / ColM / Ferricrocin и MalFGK ₂ -MalE.В детергентах эти белки проявляют связывание / активность, несовместимую с их характеристиками в липидной системе.

6) В рукописи отсутствует надлежащее обсуждение. Наиболее проблематично то, что авторы вообще не обсуждают, что концепция пептидов, используемых в качестве суррогатов детергентов, вовсе не нова. Скорее всего, он был впервые описан в 80-х и 90-х годах как пептитергент (вы можете найти это слово даже в Википедии). См. Также в Schafmeister CE, Miercke LJ, Stroud RM. Структура на 2,5 A сконструированного пептида, который поддерживает растворимость мембранных белков.Наука. 1993 29 октября; 262 (5134): 734-8. Кроме того, существуют липопептидные детергенты (LPD), наноструктурированные β-листы (см. Tao H, Lee SC, Moeller A, Roy RS, Siu FY, Zimmermann J, Stevens RC, Potter CS, Carragher B, Zhang Q. Engineered наноструктурированные пептиды β-слоя защищают мембранные белки. Nat Methods.2013 Aug; 10 (8): 759-61). Кроме того, были разработаны короткие пептиды для стабилизации мембран, которые намного дешевле производить, чем пептид NSP из 37 аминокислот (см. Kiley P, Zhao X, Vaughn M, Baldo MA, Bruce BD, Zhang S.Самособирающиеся пептидные детергенты стабилизируют изолированную фотосистему I на сухой поверхности в течение длительного времени. PLoS Biol. 2005 июл; 3 (7): e230. Epub 2005, 21 июня)

Важным является вопрос, превосходит ли пептид NSP вообще или в какой степени эти ранее описанные методы с использованием амфифильных пептидов, в частности коротких дизайнерских пептидов, как описано у Kiley et al., 2005). Крайне важно, чтобы этот вопрос был решен экспериментально с помощью функционального анализа, включающего переносчик мальтозы и / или BRC.

Полностью согласны с рецензентом. Рукопись изначально была представлена ​​как краткое сообщение с ограничениями по тексту. Мы переписали разделы «Введение» и «Обсуждение», чтобы можно было учесть многие хорошо продуманные комментарии выше. В пересмотренной рукописи мы объясняем, почему пептидиск превосходит предыдущие методы на основе пептидов, а также обращаемся к системам на основе синтетических полимеров, основанных на белковых каркасах. Мы комментируем возможные ориентации пептида в пептидиске, а также возможность того, что детергенты останутся в частицах.

Обсуждение должно также включать концепцию стабилизации мембранных белков посредством пептид-белковых взаимодействий (пептидиск) по сравнению с взаимодействиями липидных белков (нанодиск / сапозины / протеолипосомы). И, наконец, необходимо более подробно рассмотреть амфиполы (которые концептуально наиболее тесно связаны с пептитергентами и пептидисками).

Мы изменили Обсуждение, чтобы охватить эти моменты более подробно.

[Примечание редакции: ответы автора на повторную рецензию приводятся ниже.]

Рукопись была улучшена, но остаются некоторые проблемы, которые необходимо решить до принятия, как указано ниже:

1) Что интересно в пересмотренной версии, так это тот факт, что последовательность исходного пептида NSP, как он присутствует в ApoA1, фактически была обратной, и это привело к увеличению растворимости пептида. Почему эта информация полностью отсутствовала в первой версии?

Последовательность, использованная в этом исследовании, последовательно указывается в дополнительной таблице и обозначается как NSP (т.е. наноразмерный пептид), поскольку мы не обнаружили значительных различий в эффективности восстановления по сравнению с последовательностью NSP, описанной Kariyazono et al. Однако проблемы низкой растворимости стали для нас более очевидными после представления первой версии рукописи. Поэтому мы сочли важным представить эту информацию в новой редакции, включить дополнительные экспериментальные данные, а также определить момент гидрофобности для объяснения этой разницы (Рисунок 8 — рисунок в приложении 1). Во избежание путаницы с Кариязоно и соавт., нам пришлось переименовать эту последовательность в NSP _r в пересмотренной версии, и было очевидной ошибкой не обозначить ее как таковую в первом представлении.

2) Точная последовательность пептида NSPr должна быть указана непосредственно в разделе «Материалы и методы» раздела «Биологические реагенты и пептиды» (мне было трудно найти ее в дополнительном файле 1).

Последовательность NSPr была добавлена ​​в раздел «Материалы и методы рукописи», озаглавленный «Пептиды», в дополнение к дополнительному файлу 1.

3) В рукописи авторы указывают, что метод недорогой. Однако мне все равно было бы интересно узнать, сколько стоит мг или грамм и сколько вам понадобится для эксперимента (с указанием разумного диапазона).

В качестве примера, содержание пептидов в MsbA-peptidisc составляет от общей молекулярной массы. Поэтому при восстановлении MsbA в пептидиске с использованием метода на гранулах в количествах, подходящих для скрининга кристаллизации (~ 20 мг / мл, 200 мкл), используется по крайней мере ~ 1 мг пептида.Стоимость пептида может составлять всего ~ 5-15 $ / мг, цена зависит от поставщика, количества и чистоты, таким образом, стоимость пептида для скрининга кристаллизации может быть в пределах ~ 5-15 $. Эквивалентная сумма MSP (https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m6574?lang=en&region=CA) будет стоить около 80 долларов. Конечно, на этапах очистки (IMAC, SEC, этапы концентрации) теряется дополнительный пептид. Окончательная стоимость подготовки этого количества MsbA в пептидиске для скрининга кристаллов в нашей лаборатории составляет 20 долларов, если предположить, что мы теряем около 60% MsbA на этапах очистки.Для сравнения, каждая сидящая кристаллическая пластина Hampton будет стоить около 5 долларов. В случае ЭМ-экспериментов стоимость еще ниже, поскольку требуется меньше белка (5-10 мг / мл). В любом случае метод на гранулах важен для ограничения общей стоимости, поскольку раствор пептидиска можно повторно использовать несколько раз, поскольку только необходимое количество пептида связывает белок. Для сравнения, восстановление на колонке более расточительно, поскольку первоначальный 10-кратный избыток пептида не может быть восстановлен, поскольку он фракционируется с примесями небольшого размера.В растворах на геле используется примерно 2-8 мкг NSP _r , поэтому затраты на оптимизацию чрезвычайно низки. Еще одно очень важное соображение — это рабочее время, обычно связанное с приготовлением других мембранных каркасов. С пептидиском дело обстоит иначе, поскольку продукт можно производить.

4) Что касается примесей пептида, авторы дали интересный ответ в ответном письме (т.е. что большая часть примеси на самом деле является тем же пептидом, у которого отсутствует конечная аминокислота).Об этом тоже нужно упомянуть в рукописи.

Эта информация и степень чистоты пептидов теперь представлены вместе в одном месте в разделе «Материалы и методы», озаглавленном «Пептиды».

5) Авторы ссылаются на домашнюю страницу, чтобы заказать / получить пептид: www.peptidisc.com. Однако домашняя страница пока работает. Похоже, что авторы создадут или уже основали новую компанию по коммерциализации пептидиска. Необходимо декларировать потенциальные финансовые конкурирующие интересы.

Недавно мы запустили веб-сайт с целью доставить NSP _r в комплекте вместе с модельными мембранными белками, чтобы другие исследователи могли легко воспроизвести эксперименты по восстановлению ядра, которые мы представляем в этой рукописи, прежде чем приступить к своей собственной цели. В рукописи мы упоминали: «Чтобы облегчить доступ академического сообщества, на сайте www.peptidisc.com доступны массовые пептиды NSP _r и основные протоколы», и при необходимости мы можем заявить о конкурирующем финансовом интересе.Наша цель — сделать метод доступным для всех, и предполагаемая стоимость будет отражать небольшую выручку, покрывающую его распространение и усилия по обеспечению его надлежащего применения, включая технические советы. Мы еще не выпустили веб-сайт из-за того, что статья все еще находится на рассмотрении и скоро после публикации. Мы также назвали другие производители пептидов, которые использовались в этом исследовании. Пептидиск представляет собой дополнительную интересную возможность по сравнению с другими каркасами, поскольку его использование не защищено интеллектуальной собственностью, поэтому его могут легко использовать как ученые, так и промышленность.

https://doi.org/10.7554/eLife.34085.023

Раскрытие важности детергентов в изучении мембранных белков

Вопрос:

Какова роль детергентов в изучении мембранных белков?

Говорит белковый человек:

Детергенты — это амфипатические молекулы, которые можно использовать для извлечения, солюбилизации и манипулирования (разрушения или формирования) мембранных белков из биологических мембран для последующей биохимической и физической характеристики.Кроме того, детергенты можно использовать для контроля кристаллизации белка, предотвращения неспецифического связывания в процедурах аффинной очистки и иммуноанализа, а также в качестве добавок при электрофорезе.

Хотя эти вещества могут показаться обманчиво простыми, они демонстрируют сложное поведение, поскольку они связываются и взаимодействуют с другими молекулами. Таким образом, моющие средства могут быть другом и врагом исследователя одновременно. Однако, поняв, как они работают, вы можете использовать их, чтобы лучше понять структуру и функцию мембранных белков.

Как они работают?

Благодаря своей уникальной структуре моющие средства могут действовать как отличные солюбилизирующие вещества. У них полярная, гидрофильная (водолюбивая) группа головы, которая простирается от длинного гидрофобного (водобоязненного) хвоста. В водных растворах гидрофильные головки взаимодействуют с водородными связями молекул воды, в то время как гидрофобные хвосты объединяются с образованием высокоорганизованных сферических структур, называемых мицеллами, при достижении определенной концентрации (известной как критическая концентрация мицелл или CMC).Вместо этого в неводных растворах детергенты образуют обратные мицеллы.

На средний размер и форму мицелл влияет тип, размер и стереохимия поверхностно-активного вещества и окружающей среды растворителя. И хотя концентрация мицелл увеличивается по мере того, как вы добавляете в раствор больше детергента, концентрация мономеров детергента остается постоянной выше CMC.

Итак, как они солюбилизируют белковые мембраны? Как вы, возможно, уже знаете, биологические мембраны обладают такими же амфипатическими свойствами, что и моющие средства.У них есть заряженная полярная головка, соединенная с двумя гидрофобными хвостами и образующая бислой (гидрофобные хвосты зажаты между двумя сторонами полярных головных групп). Между этими слоями находятся ваши белки и липиды.

Вы не можете высвободить эти белки в водных растворах, так как они прочно удерживаются в липидном бислое за счет гидрофобных взаимодействий между липидными хвостами и гидрофобными белковыми доменами. Однако вы можете извлечь целевые белки, используя наиболее подходящий раствор моющего средства.

При низком содержании моющих растворов молекулы детергента проникают через липидную мембрану и начинают разделять липидный бислой. При более высоких концентрациях (равных или превышающих КМЦ моющего средства) молекулы детергента насыщают липидный бислой и солюбилизируют как гидрофобные, так и амфипатические молекулы в растворе. Это приводит к образованию водорастворимых комплексов белок-детергент, детергентных и детергентно-липидных мицелл.

Растворы поверхностно-активных веществ могут также проявлять фазовое поведение, которое может включать самоассоциацию и кристаллизацию.Температура помутнения , или температура, при которой прозрачный гомогенный раствор моющего средства становится мутным и разделяется на два несмешивающихся раствора (один с высоким содержанием моющего средства, а другой с низким содержанием моющего средства) все еще используется для очистки мембранного белка.

Классификация и характеристика моющих средств

В основном моющие средства делятся на одну из трех категорий (ионные, неионные и цвиттер-ионные), и их поведение часто определяется характеристиками группы голов и хвостов.

Ионные детергенты обычно используются, когда желательно полное разрушение клеточной структуры и денатурация белков. Этот тип моющего средства связывается с белковыми молекулами и передает им общий заряд моющего средства. Используя определенные буферные условия, различные детергенты могут эффективно проникать между бислоями мембраны в концентрациях, достаточных для образования смешанных мицелл. Некоторые общие примеры включают анионные детергенты додецилсульфат натрия (SDS) и дезоксихолевую кислоту, натриевую соль или дезоксихолат, а также катионный детергент гексадецилтриметиламмоний бромид (CTAB).

Неионные или неденатурирующие детергенты имеют незаряженную гидрофильную головную группу и обычно предпочтительны для выделения биологически активных мембранных белков из-за их способности разрушать липид-липидные и липид-белковые взаимодействия без нарушения естественных взаимодействий и структур водорастворимые белки. Они просто связываются с гидрофобными частями мембранных белков, чтобы сделать их растворимыми. Некоторые общие примеры включают серии Triton, Tween и Brij.

Цвиттерионные детергенты защищают нативное состояние и не изменяют нативный заряд белковых молекул. Эти детергенты идеально подходят для изоэлектрической фокусировки и 2D-электрофореза.

Синтетические цвиттерионные детергенты известны как сульфобетаины, группа веществ, которые сохраняют свои цвиттерионные свойства в широком диапазоне pH.

Использование детергентов имеет важное значение для растворения и очистки мембранных белков.Это чрезвычайно важно, поскольку мембранные белки остаются одной из самых сложных, но наименее изученных областей протеосомы. Таким образом, понимая различные параметры детергента, мы можем рассчитывать на дальнейшее понимание интегрального мембранного белка.

Природа детергента и его применение в мембранных белках

---

В последние годы исследования мембранных белков достигли значительного прогресса, который неотделим от разработки связанных с мембранами инструментов и реагентов ^[1] .Среди них детергент играет важную роль в экстракции, очистке и работе мембранного белка. Их амфифильная природа позволяет им взаимодействовать с гидрофобными мембранными белками, извлекать и растворять мембранные белки из природных липидных бислоев. Но растворение не означает, что естественная структура и стабильность белка могут быть полностью восстановлены; Детергент, который может одновременно эффективно извлекать мембранный белок, также может не подходить для очистки и дальнейших биохимических исследований; И моющее средство, подходящее для определенного мембранного белка, может не подходить для другого мембранного белка.Одним словом, не существует набора критериев, по которым можно было бы оценить, подходит ли то или иное детергент для исследования мембранного белка. В этой статье описаны физические и химические свойства моющих средств, а также их применение в процессе мембранного белка. Надеемся, что наше введение поможет вам выбрать правильное моющее средство.

Детергент — это разновидность поверхностно-активного вещества, которое находит широкое применение, в том числе: электрофорез в полиакриламидном геле (PAGE), растворение телец включения, приготовление липосом, солюбилизация мембранных белков и исследования структуры активности.Более того, детергент также можно использовать в качестве модели мембраны для исследований in vitro .

Функция детергента связана с его структурой: полярная гидрофильная часть молекулы детергента используется в качестве гидрофильной головной группы, в то время как неполярная гидрофобная часть используется в качестве хвостовой группы (рис. 1A). Некоторые детергенты также имеют линзовидную форму (рис. 1B), которые имеют полярные и неполярные поверхности, включая производные желчных кислот, такие как CHAPS и CHAPSO.

Фигура 1.Моющий мономер

Моющие средства можно разделить на ионные (катионные или анионные), неионные и цвиттерионные в соответствии с различными гидрофильными группами.

Ионные детергенты включают додецилсульфат натрия (SDS), N-лаурилсаркозин, CTAB и т.д., которые эффективны при извлечении белков из мембраны. Эти детергенты могут эффективно нарушать взаимодействие между внутримолекулярными и межмолекулярными белками, но они жесткие и склонны денатурировать белок.Среди них соли желчных кислот также являются ионными детергентами, такими как холат натрия и дезоксихолевая кислота, но их скелет состоит из жестких стероидов, которые мягче, чем линейные ионные детергенты.

Неионные детергенты включают мальтозиды, глюкозиды и полиоксиэтиленгликоли. Особенностью этого типа моющего средства является то, что гидрофильные головные группы не заряжаются. Эти детергенты мягкие, неденатурированные и могут нарушать взаимодействия между белково-липидными и липидно-липидными.

К цвиттерионным детергентам относятся цвиттергенты, фос-холины и CHAPS / CHAPSO и т. Д. Их гидрофильные головные группы содержат положительные и отрицательные заряды. Эти детергенты электрически нейтральны, как неионные детергенты, но они обычно способны нарушать взаимодействие между белками, как ионные детергенты, поэтому они мягкие. В наиболее успешных исследованиях белков мембран ЯМР используются цвиттерионные детергенты, например Fos-Choline 12.

Пожалуйста, обратите особое внимание на следующее содержание, если вы хотите узнать больше ……

3 . 1 The C ritical M icelle C концентрация , CMC

Мицеллизация — ключевое явление при рассмотрении вопроса о применении моющих средств. Каждый вид детергентов имеет значение CMC, когда концентрация детергента выше, чем CMC, мономер самоорганизуется в нековалентный агрегат, также называемый мицеллами. На самом деле мицеллообразование не происходит при одной концентрации, а происходит в узком диапазоне концентраций.

При применении детергентов к мембранным белкам одно практическое правило состоит в том, что рабочая концентрация детергента должна быть не менее 2xCMC, а массовое соотношение детергента к белку — не менее 4: 1. Когда мембранный белок растворяется из исходной мембраны, рабочая концентрация детергента намного выше, чем у CMC, а молярное отношение детергента к липиду составляет 10: 1. Следовательно, CMC определяет количество детергента, которое должно быть добавлено к различным белкам и мембранным продуктам ^[2] .

Значение CMC моющего средства не является фиксированным, оно будет меняться в зависимости от pH, ионной силы и температуры раствора ^[3] . Например, значение CMC ионного детергента будет уменьшаться с увеличением ионной силы.

3 . 2 Мицеллизация

Мицеллы представляют собой агрегаты мономера детергента в растворе, и процесс образования мицелл называется мицеллообразованием ^[4] .Детергент взаимодействует с мембранным белком и мембраной в виде мицелл, и растворение белка зависит от образования мицелл в растворе. Обычно считается, что мицеллы имеют «шероховатую» поверхность, которая представляет собой динамическую структуру. Мономер детергента в мицеллах быстро обменивается со свободным мономером детергента в растворе. Как только мембранный белок растворяется, мы обычно думаем, что молекулы детергента образуют тор вокруг гидрофобного трансмембранного домена.

4 .1 Замена или R Удаление D моющих средств

Детергенты, которые могут эффективно растворять мембранные белки, могут быть неподходящими для дальнейших биохимических исследований, которые требуют переноса мембранных белков в более подходящий раствор детергента. При сборке липосом или нанодисков нам нужно удалить моющее средство. CMC можно использовать для определения доступного метода замены или удаления нежелательных моющих средств.Детергенты с высоким содержанием CMC легко удаляются посредством диализа, а раствор детергента можно разбавить до значения ниже CMC посредством диализа, тогда мицеллы распадаются на мономеры, и мономеры могут легко проходить через диализную мембрану. Как правило, раствор детергента диализуют буфером без детергента с объемами, превышающими 200-кратный, и меняют буфер несколько раз в средний период, например Fos-Choline 12. Детергенты с низким содержанием КМЦ обычно удаляются адсорбцией гидрофобные гранулы, такие как DDM.Его также можно очистить на никелевой колонке. После связывания мембранного белка с материалом колонки замените буфер другим раствором детергента.

4 . 2 Идентификация I M embrane P roteins

Если мембранный белок идентифицируется с помощью SDS-PAGE, обработка кипячением может привести к агрегации мембранных белков.Таким образом, мы можем инкубировать мембранный белок при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем провести гель-электрофорез. Мембранные белки обычно не мигрируют с молекулярной массой, предсказанной в SDS-PAGE. Как правило, они мигрируют быстрее, это означает, что их молекулярная масса будет выглядеть меньше, вероятно, потому, что складка не полная или каждая единица молекулярной массы сочетается с большим количеством SDS, чем водорастворимый белок ^[5] .

Мы только что представили основные свойства моющих средств, но на самом деле приготовление мембранного белка очень сложно.Для большинства мембранных белков трудно получить достаточное количество из естественной окружающей среды, поэтому их необходимо сверхэкспрессировать. К сожалению, трудно получить достаточное количество функционального и стабильного мембранного белка с помощью E.coli или других систем экспрессии. В целом, чем больше у них трансмембранных доменов, тем труднее экспрессировать мембранные белки, такие как аквапорины, содержащие 6 трансмембранных доменов.

5 .1 A квапорины

Аквапорин, расположенный на клеточной мембране, представляет собой трансмембранный белок с 6 трансмембранными доменами, и они образуют «канал» на клеточной мембране, который может контролировать поступление воды в клетку и выход из нее. Молекулы воды образуют единый столб при прохождении через аквапорин, когда они входят в изогнутый узкий канал, внутренняя диполярная сила и полярность помогают молекулам воды вращаться под соответствующим углом через узкий канал.

Аквапорины преимущественно присутствуют в почках млекопитающих, а также существуют в растениях. Аквапорины играют важную роль в концентрации мочи в почках, физиологии пищеварения, нейрофизиологии, физиологии дыхания, физиологии глаз и физиологии кожи.

5 ,2 Активный A квапоринов

Cusabio применяет технологию свободной экспрессии клеток E.coli. Технология не ограничена структурой клеток и подходит для экспрессии мембранных белков и токсичных белков, токсичных для клеток, с выходом до уровня мг / мл.Согласно традиционной клеточной экспрессии, обычная обработка мембранных белков требует разрушения клеточной мембраны, что имеет тенденцию вызывать изменение конформации встроенной в нее мембраны или даже денатурацию. Но открытая система бесклеточной экспрессии E.coli может оптимизировать выход экспрессии in vitro несколькими способами, а экспрессированные мембранные белки могут быть немедленно охвачены детергентами после трансляции во время экспрессии, чтобы максимально избежать воздействия водного раствора.Сейчас мы уже успешно разработали следующие активные аквапорины.

5 .2.1 Рекомбинантный Escherichia coli Aquaporin Z (aqpZ)

Функция: канал, обеспечивающий осмотическое движение воды в обоих направлениях. Он участвует в осморегуляции и поддержании тургора клеток во время увеличения объема в быстрорастущих клетках.Он обеспечивает быстрый вход или выход воды в ответ на резкие изменения осмолярности.

Рис 2. aqpZ в мицеллах детергента

Фигура 3. Связывающая активность aqpZ с ytfE.

Активность : измеряется по его связывающей способности в функциональном ELISA. Иммобилизованный aqpZ в концентрации 5 мкг / мл может связывать человеческий ytfE. ЕС ₅₀ белка ytfE человека составляет 197,90-259,70 мкг / мл.

[1] Р.М. Гаравито, С. Фергюсон-Миллер, Моющие средства как инструменты в биохимии мембран, J. Biol. Chem. 276 (2001) 32403–32406.

[2] Anatrace, детергенты и их использование в науке о мембранных белках.

[3] М. Ле Мэр, П. Шампей, Дж. В. Мбллер, Взаимодействие мембранных белков и липидов с солюбилизирующими детергентами, Biochim. Biophys.Acta 1508 (2000) 86–111.

[4] Из Википедии, бесплатной энциклопедии.

[5] Принципы и методы очистки стимулирующих белков, 28-9095-31.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.