Вывести кровь с ткани: 8 методов как отстирать кровь: свежие и застарелые пятна

Футболка

С белой тонкой футболки свежий кровавый след отстирывают, замачивая одежду на ночь в солевом холодном растворе. Утром достаточно постирать вещь в стиральной машинке.

Чтобы избавиться от застарелого пятна, смешивают в равных пропорциях аммиак (нашатырь) и средство для мытья посуды. Смесь наносят на испачканное место и оставляют на 2 ч. Проблемный участок застирывают.

Чтобы очистить плотную цветную ткань, куском грубого материала в загрязнение втирают соду. Двигаться при этом нужно от краев пятна к центру, чтобы не размазать кровь. Очищенную футболку стирают с обычным средством для стирки.

К просмотру лайфхаки:

Нижнее белье

Чтобы отстирать месячные, нижнее белье замачивают в ледяной воде с солью. Через час кровь легко удаляется с одежды.

Если предыдущий способ не помог, используют пятновыводитель или мыло «Антипятнин». Средство наносят локально на проблемный участок и оставляют на час.

Светлые хлопковые трусы можно прокипятить с отбеливателем или лимонной кислотой. Этот метод не подходит для синтетики.

Рубашки

Цветные рубашки и ночные сорочки отстирывают целым комплексом средств. Сначала одежду замачивают в растворе нашатырного спирта на час, а затем выполаскивают в холодной воде. Оставшийся след протирают перекисью водорода. После этого рубашку стирают с хозяйственным мылом.

Чтобы отстирать кровь с белой рубашки, используют гидроперит в таблетках. Проблемный участок и таблетку смачивают холодной водой. Гидроперитом трут пятно до тех пор, пока оно не исчезнет.

Шелк

Шелк относится к деликатным тканям. В данном случае агрессивные средства не подойдут. Они способны разрушить структуру ткани.

Для борьбы с кровью на шелке применяют кашицу из картофельного крахмала или средство для мытья посуды. Средство наносят на пятно и оставляют на час. Затем отстирывают в холодной воде.

Пятна на мебели

Отмыть кровь с дивана и другой мягкой мебели сложнее, чем с одежды, потому что в данном случае ткань постирать не получится. Не рекомендуется обильно мочить обивку, чтобы не испортить ее.

Свежее загрязнение оттирают сначала солевым раствором, а затем мыльным. Остатки средств смывают чистой водой.

Чтобы отстирать засохшую кровь, сначала испачканный участок трут зубной щеткой, удаляя сухие частицы. Далее используют средства. Наиболее эффективными считаются следующие варианты:

1. Пена для бритья. Пену наносят на загрязнение и оставляют на 15 мин. Остатки стирают грубой тканью. Этот метод можно применять для изделий из кожи и ее заменителей.
2. Средство для ковров. Оно эффективно борется с любыми загрязнениями. Используют по инструкции.

Смотрите видео по теме:

Кровь на матрасе

Для чистки матраса используют пятновыводитель или очиститель ковров. Сначала загрязнения обрабатывают льдом, давая полностью ему растаять. Затем наносят выбранный порошок, который оставляют до полного высыхания. Остатки стирают грубой тканью. Для удаления оставшихся следов используют аммиак.

Чего нельзя делать с пятном крови на ткани

Есть несколько правил, не соблюдая которые кровь будет отстирать сложнее. Они представлены в списке:

1. Для удаления крови с одежды используют только холодную воду. При высоких температурах белок, который содержится в крови, сворачивается и проникает глубоко в нити ткани. Вывести после стирки в горячей воде кровавое пятно практически невозможно. Исключение: можно прокипятить натуральные ткани с лимонной кислотой или отбеливателем.
2. Нельзя тереть свежее загрязнение. Трение способствует размазыванию крови по ткани и ее втиранию в структуру материала.
3. Перед использованием любого средства его проверяют на незаметном участке ткани. Если через полчаса материал не испортился, значит, способ подходит.
4. При использовании хлора важно учитывать, что часто остаются очертания выведенного пятна. Поэтому предпочтение отдают специальным пятновыводителям.

Чем старее пятно крови, тем сложнее его отстирать. Однако, выбрав подходящий способ, можно избавиться даже от запекшихся пятен. Главное – соблюдать основные правила.

Какие способы борьбы с кровью вы знаете еще? Расскажите об этом в комментариях. Поделитесь актуальной информацией с друзьями в соцсетях.

Как удалить рубцовую ткань

РАСТВОРИТЬ ТКАНИ ШРАМА СИСТЕМНЫМИ ФЕРМЕНТАМИ

Автор: Ахава Сара Фишер

Повышение уровня энергии является преимуществом приема системных ферментов

Ускоренный путь природы к исключительному здоровью, гибкости и исцелению.

Если вы не знаете о системных ферментах и ​​их мощных преимуществах для здоровья, возможно, сейчас самое время изучить очень драматическое решение природы для оптимального здоровья и борьбы со старением.

Давайте начнем с быстрого ознакомления с ферментами в целом. Практически все живые существа, в том числе те, что мы готовим и едим, содержат ферменты. На самом деле существует более 3000 различных видов ферментов. Например, сырые продукты богаты ферментами. Они содержат активные ферменты. После употребления сырого шпината клетки листа сразу же разрушаются, успешно высвобождая питательные вещества. В материнском молоке также содержится множество ферментов, которые ценны для пищеварения младенцев и производства полезных бактерий.Фактически все живые животные производят ферменты в пищеварительном тракте. Ферменты настолько незаменимы, что их часто называют свечами зажигания для подавляющего большинства химических реакций, делающих жизнь возможной.

Люди хорошо разбираются в пищеварительных ферментах, и их обычно принимают в качестве пищевых добавок. Пищеварительные ферменты давно признаны за их важность в процессе пищеварения.

Фибрин — это фибриллярный белок, образующий рубцовую ткань

Системные ферменты, с другой стороны, играют иную роль, с которой мало кто знаком.Системные ферменты переваривают избыток фибрина в организме. Этот фибрин является основным компонентом, ответственным за нездоровое накопление рубцовой ткани, артериальных бляшек, токсинов / вирусов, образование тромбов, а также тканевую паутинку, которая с возрастом имеет тенденцию покрывать наши внутренние органы.

По предложению доктора Джеймса Ховенстайна, доктора медицины. «Ферменты широко известны своей важностью для переваривания пищи. Но они также разрушают циркулирующие иммунные комплексы в крови. Ферменты могут предотвращать отложение слишком большого количества фибрина в ранах, переломах и суставах.Эти ферменты также удаляют некротический мусор и избыток фибрина из кровотока. Протеолитические ферменты, используемые в ферментной терапии, растворяют фибрин. Когда в ферментном препарате присутствуют сильные протеолитические ферменты, их действие может быть достаточно сильным, чтобы фактически постепенно переваривать рубцовую ткань. Это, конечно, требует времени, но со временем вся рубцовая ткань может исчезнуть ».

Шрамы не только неприглядные, но и зачастую болезненные

Фибрин действительно является первопричиной старения и болезней.Он вызывает застой и вялость в теле, уменьшая его гибкость и молодость. Как указано на сайте biomediclabs.com, фибрин — это прочный белок, состоящий из длинных волокнистых цепочек. Он образуется из фибриногена, растворимого белка, который вырабатывается печенью и содержится в плазме крови. Фибрин имеет тенденцию образовывать циркулирующие комплексы, которые создают препятствия для поглощения целебных питательных веществ в областях воспаления и вокруг них. ‘

Когда наше тело получает травму, оно начинает вырабатывать определенные химические вещества, называемые простагландинами.Определенная форма простагландина вызывает воспаление. Результатом этого является отек, сужение кровеносных сосудов и снижение проницаемости тканей. Системные ферменты помогают, расщепляя эти белки в травмированной ткани. Системные ферменты играют огромную противовоспалительную роль, одновременно вызывая быстрое удаление клеточного мусора.

Учитывая, что системные ферменты являются неотъемлемой частью расщепления фибрина, становится довольно ясно, что они могут быть ключом природы к сохранению молодости, жизнерадостности и подвижности тела.

Украшение кожи внутри и снаружи

Вы можете спросить: «Почему мы должны принимать ферменты в форме добавок, если организм вырабатывает их естественным образом? ”

Это правда, что ферменты вырабатываются организмом. Однако с возрастом в организме вырабатывается значительно более низкий уровень ферментов. Вот почему у пожилого человека шрамы сильнее, чем у его более молодого коллеги, у которого такая же рана. Неудивительно, что процесс старения заметно начинается в возрасте от 27 до 35 лет.Интересно, что именно в этом возрасте производство ферментов, растворяющих белок, начинает уменьшаться.

Однако то, что интересно в наши дни, — это наша способность получать системные ферменты из многочисленных органических источников. Нам посчастливилось пользоваться их мощными преимуществами, позволяющими в некотором смысле повернуть время вспять.

Это линейка продуктов, распространяемых Biomedic Labs

Biomedic Labs (www.biomediclabs.com) является надежным источником лучших системных ферментов. Их ферменты имеют растительную основу (за исключением ингредиента серрапептазы, выделяемого тутовым шелкопрядом) и сочетают в себе одни из самых мощных системных ферментов, доступных сегодня. В их составах используются комбинации ферментов, которые создают динамичную настойку. Самыми популярными продуктами, продаваемыми на их сайте, являются Serra-RX и Serracor. Они производятся с использованием технологии Bioactive Protein Peptide System (BPPS), запатентованного процесса, который включает дополнительные биоактивные пептиды и обеспечивает большую стабильность ферментов, абсорбцию и биодоступность.Таким образом, они разработаны для максимальной фибринолитической активности.

Два элемента, которые используют в высоких дозах их составители, — это серрапептаза и наттокиназа. Это две наиболее дорогие и ценные формы системных ферментов.

Шелкопряды выделяют серрапептазу

Согласно данным Biomedic Labs, серрапептаза — это мощный протеолитический фермент, полученный из бактерий, изначально обнаруженных в кишечнике шелкопряда. Бактерия Serratia mercesans E1 продуцирует серрапептазу, фермент, который позволяет шелковичному червю растворять свой шелковый кокон и появляться после метаморфоза.В настоящее время Serratia выращивают в культурах для производства серрапептазы путем ферментации. Многочисленные исследования и клинические исследования показали, что серрапептаза обладает противовоспалительными, протеолитическими (растворение белков) и фибринолитическими (растворение фибрина) свойствами. Исследования также показывают, что серрапептаза уменьшает рубцовую ткань, улучшает заживление тканей и значительно уменьшает воспаление.

Серрапептаза также обладает уникальной способностью переваривать неживую ткань, которая является побочным продуктом реакции заживления, не нанося вреда живой ткани.Serra RX80 (серрапептаза) имеет энтеросолюбильное покрытие, позволяющее выдерживать кислотные условия желудка без разложения. Это обеспечивает оптимальное всасывание в тонком кишечнике и большую системную активность. Устойчивое к pH энтеросолюбильное покрытие разрушается после попадания в щелочную среду кишечника ».

Удивительная красота шелковой моли после выхода из кокона

Итак, я столкнулся с невероятными знаниями о возможностях обновления моего здоровья и получения доступа к линейке продуктов, предлагаемых Biomedic Labs.Формулы, которые могут только улучшить мою жизнь до энной степени. Я решил начать трехмесячный эксперимент, который поднял мое здоровье и физическую форму до невиданного ранее уровня. Мой путь к системным ферментам задокументирован в моем блоге. Здесь вы можете просматривать мои еженедельные обновления о моем режиме приема ферментов. Я рассказал о различных этапах, которые я прошел в процессе детоксикации фибрина, и о многочисленных преимуществах, которые я получил в результате.

НЕДЕЛЯ 1

http: //mahiraamirkhan.blogspot.ru / 2011/06 / superbeing-mode-week-1.html

НЕДЕЛЯ 2

http://mahiraamirkhan.blogspot.com/2011/06/superbeing-regime-week-2-healing-crisis.html

НЕДЕЛЯ 3

http://mahiraamirkhan.blogspot.com/2011/07/week-3-path-to-being-superbeing-miracle.html

НЕДЕЛЯ 4

http://mahiraamirkhan.blogspot.com/2011/07/week-4-bliss-of-good-health.html

НЕДЕЛЯ 5

http://mahiraamirkhan.blogspot.com/2011/07/week-5-enzymes-to-rescue.html

Достаточно сказать, что от приема системных ферментов я почувствовал себя не меньше, чем сверхчеловеком! Я шутливо назвал свое путешествие «Режимом суперсуществования». Это была настоящая поездка! И если плащ можно было надеть, я с удвоенной силой хлестал его за собой в полете! Если бы у меня был выбор, я бы остался на ферментах всю свою жизнь. Влияние, которое они оказали на качество моей жизни, было огромным. Они не только начали разъедать старую рубцовую ткань, но и улучшили мою гибкость и, таким образом, уменьшили мою боль, когда дело доходило до определенных телодвижений.

Детоксикационные и очищающие свойства ферментов

Что привлекло мое внимание, так это то, что я ранее принимал системные ферменты от разных компаний до этого эксперимента, но я не получил такого же уровня результатов. Я хотел узнать, что именно в продуктах, которые я получал от Biomedic Labs, делало их намного лучше тех брендов, с которыми я сталкивался в прошлом.

Я договорился поговорить с владельцем биомедицинских лабораторий Брэдом Кастером, чтобы получить более полное представление об этом предмете.Брэд был чрезвычайно щедрым, уделял время, заботу и внимание к деталям, что сделало мой опыт общения с его компанией еще более позитивным.

Я начал с того, что попросил его рассказать о развитии своей карьеры в этой целостной области. И это то, что он сказал

БРЭД Кастер, владелец Biomedic Labs и его прекрасная жена Оливия

Брэд Кастер: «Я всегда был здоров с тех пор, как учился в старшей школе. Я тренировался, пытался быть здоровым в колледже. В раннем возрасте 22 лет я прошел несколько курсов по здоровью в колледже.Мне представилась возможность жить в Нью-Йорке, и я переехал с Западного побережья на Восточное. Когда я вырос в Аризоне, Нью-Йорк стал шоком для меня и моей жены. В большом городе все было по-другому. Я начал работать в магазине Vitamin прямо на Уолл-стрит. Это было интересное время, и я познакомился со множеством новых людей. Я обнаружил, что мне очень нравится общаться со своими клиентами и помогать им с их здоровьем. Итак, мы провели год в Нью-Йорке. К тому времени это было все, что я мог выдержать в городской жизни.Я оставил руководящую должность и вернулся в Аризону.

Я работал с GNC два года. После этого я работал с известной компанией, специализирующейся на ферментах. Вот где действительно начался мой опыт работы с ферментами. Я проработал в компании 3 года, став продавцом №1.

К тому времени у меня были знания и опыт, чтобы основать собственную компанию. Я так много узнал о ферментах за это время.

Я понял, что системные ферменты действительно могут сделать для людей, и увидел, насколько они сильны.За эти годы я слышал так много ярких отзывов и был свидетелем степени их пользы,

Я хотел рассказать о системных ферментах. К сожалению, в отличие от Европы, они все еще не являются общепринятым названием здоровья здесь, в США. Я считаю, что в некоторых странах Европы есть ферментные препараты, прописанные врачами. Европейцы склонны придерживаться другого подхода, они берут здоровье в свои руки. Это то, что я узнал от своих зарубежных клиентов. ”

Естественное восстановление здоровья и гибкости человеческого тела

Q: Как большинство ваших клиентов узнают о вашей компании? Как они пришли к получению этих знаний об уникальных преимуществах системных ферментов?

A: «Все больше и больше людей обращаются к нам, потому что устали от здравоохранения и ищут нестандартные решения.Они стали изобретательными и исследуют естественные или альтернативные пути. Мы запускаем их на ферментах и ​​идем дальше.

Большинство наших клиентов-европейцев не могут получить необходимую им медицинскую помощь и иногда не могут обращаться к врачу в течение нескольких месяцев. Они должны изучить свои варианты. У нас также много клиентов из Австралии, Великобритании, Канады и т.д. Но у нас есть постоянные клиенты по всему миру, включая такие азиатские страны, как Малайзия и Индия. ”

Q: Итак, какие результаты вы наблюдали после того, как человек начал курс системных ферментов?

A: «Огромный эффект, который я слышал, например, наступил после того, как человек начал принимать добавки в течение месяца.Я действительно слышал это со всеми видами ферментных продуктов. Я получил так много отзывов от людей, у которых были большие рубцовые ткани от кесарева сечения. Их условия были успешно изменены. Я лично заметил изменения и в себе ».

Q: Что вы лично испытали на ферментах?

A: «Ну, когда мне было двадцать пять, у меня был очень сильный ожог на внешней стороне ноги. Это был ожог третьей степени. Я начал принимать ферменты до 10-15 в день.За два месяца ожог исчез на 50%. А через 2 года даже не было видно, что это было!

Также есть опыт моей жены: у нее было 3 кесарева сечения, и ее исцеление было намного выше, чем у всех, что я когда-либо видел. Обычно после такой серьезной процедуры у вас остается довольно заметный шрам. И все же ее шрам очень плоский, его почти не видно. ”

Гибкость восстановлена!

Q: Как скоро после кесарева сечения она начала принимать ферменты? Я слышал, что ферменты разжижают кровь.Так что лучше подождать некоторое время после операции?

A: «Да, мы ждали около двух недель после ее процедуры. Она принимала от 9 доз Serracor-NK в день до 4 доз Serra RX80. Она делала это в течение 4 месяцев и с тех пор продолжает принимать половину этой дозы каждый день. Фактически, ей сделали кесарево сечение всего 8 месяцев назад, и она уже практически поправилась.

Это определенно не норма. У нас есть друзья, которые родили детей примерно в то же время, что и моя жена.И я видела шрамы у нашего друга. Он довольно заметен и не похож на шрам на моей жене.

В: Лучше ли принимать системные ферменты сразу после операции? Что происходит со старыми шрамами, оставшимися на теле годами?

A: «С системными ферментами никогда не поздно. Вы все еще можете исправить свои шрамы в любой момент и многого добиться в будущем.

У меня уже 10 лет шрамы рассосались. Так что никогда не поздно.

На ум приходит еще один опыт. Около месяца назад я катался на горном велосипеде и сильно разбился, и мое лицо царапалось о деревья. У меня были корки по всему лицу. Я удвоил количество принимаемых ферментов. 5 дней спустя вы даже не могли сказать, что я врезался в дерево!

Также была область под моим бедром, которая все еще красная и заживала, но я замечаю, что она улучшается каждую неделю. Я знаю, что системные ферменты являются ключом к ускоренному заживлению. ”

Биомедицинские лаборатории предоставляют ферменты фармацевтического класса

Q: Итак, расскажите мне об уникальности вашей продукции?

A: «Основная компания, с которой мы работаем, находится в Чино, Калифорния.Они формулируют все предлагаемые нами ферментные продукты. Мы тоже вовлечены в этот процесс, и нам очень повезло, что мы можем сыграть значительную роль.

Теперь мы решили включить некоторые из самых дорогих форм системных ферментов. Это серрапептаза и наттокиназа. Существуют ферменты, такие как амилаза и бромелайн, которые эффективны сами по себе, но серрапептаза и наттокиназа очень сильны. Вам нужно будет изучить эффективность каждой формулы. Существуют разные сокращения, которые являются маркерами активности для каждой ферментной добавки.Это HUT, SU, FU и т. Д. Независимо от того, называются ли они единицами серрапептазы или международными единицами, все маркеры сами по себе одинаковы. Но исследуйте силу выбранной вами формулы.

Продукт Serracor-NK выделяется своей формулой. Я искренне верю, что они лучшие в мире. Я считаю, что они определенно лучшие в этой стране. Разработчики Serracor-NK приложили массу усилий для изучения этого продукта. Как видите, для начала нужны действительно качественные материалы.А затем сформулируйте ферменты так, чтобы каждый фермент работал синергетически друг с другом. Это настоящее искусство, и я не верю, что кто-то другой справится лучше, чем разработчики рецептов, с которыми мы работаем. ”

В: Являются ли системные ферменты Biomedic Lab органическими и подходящими для веганов?

A: «Отчасти они растительные. Это потому, что серрапептаза происходит от шелкопряда. Шелкопряд выделяет жидкость, содержащую эти ферменты, пока он находится в состоянии кокона. Что происходит с нашими лабораториями, так это то, что они культивируют организм в лаборатории посредством микро ферментации.Так что его можно по праву отнести к грибам.

Будьте уверены, мы не убиваем шелкопряда. (в шутку)

Это ферментированный продукт, произведенный в лаборатории. К счастью, мы можем выращивать его в лаборатории. Значит, они веганы ».

Q: Брэд, не могли бы вы поделиться некоторыми из самых чудесных результатов от ваших клиентов?

A: «У меня более одного впечатляющего отзыва. Не знаю, с чего начать. Хорошо, начнем с фиброза легких. Некоторые люди даже не знают, что они у них есть.Это состояние, при котором образуются рубцы легких, и оно продолжает распространяться. Люди с тяжелыми случаями легочного фиброза носят с собой кислород, чтобы облегчить дыхание. Итак, у нас был клиент, который первым откликнулся на события 11 сентября. Он подвергся воздействию большого количества дыма. Он попал в больницу на год. Он принимал 18 различных лекарств. Он начал искать в Интернете и наткнулся на нас. Очень скоро он начал принимать наши продукты и через несколько месяцев ему стало лучше. Через полтора года его выписали из больницы и лишили кислорода.Прошло 10 лет, и со временем ему стало только лучше. Этого не происходит с неизлечимой болезнью, которая обычно со временем становится дегенеративной ».

Это потрясающе. Системные ферменты, кажется, предлагают альтернативный путь к здоровью во всех случаях.

Брэд «Пациенты, которые обращаются к нам, находятся в таком экстремальном состоянии, что их врачи не дают им никакой надежды. Но мы всегда даем надежду людям, которые к нам приходят. Даже тем, у кого терминальные состояния. У нас были врачи для осмотра нашего клиента, который находился в неизлечимом состоянии.И от его первого посещения до второго за несколько месяцев улучшение было настолько большим, что его врач сказал ему, что бы он ни делал, продолжать делать это!

Я думаю, что занимаюсь системными ферментами в течение 12-13 лет, я не очень шокирован, услышав что-нибудь. Они способны на все … похоже. Я не хочу, чтобы это звучало как чудодейственное лекарство, и я не утверждаю, что это так, но так оно и есть ».

Q: Есть ли у вас какие-нибудь советы для человека, который планирует начать курс системных ферментов?

A: Системные ферменты следует принимать натощак.

• Их можно принимать 3 раза в день.
• Соблюдайте здоровую диету.
• Пейте много воды.
• Проведенные исследования показали, что уровень гидратации влияет на результаты, достигнутые с помощью системных ферментов.

Природный фонтан молодости восстанавливает подвижность, гибкость и энергию

НЕКОТОРЫЕ ОТЗЫВЫ БИОМЕДИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЙ — СИСТЕМНЫЕ ФЕРМЕНТЫ Ниже:

Состояние моего отца ухудшалось довольно быстро, и врачи здесь, в Великобритании

сказал нам, что мы ничего не можем сделать, чтобы улучшить ситуацию, а

прогноз не был благоприятным.Спустя всего пару месяцев на планшетах

его кашель почти прошел. Сейчас 9 месяцев спустя, и действительно появляется

, что его состояние стабилизировалось, мы надеемся, что в будущем результаты тестов будут

подтверждает, что это так. Эти таблетки вселили в нас надежду, когда врачи

нам ничего не дал.

C.A.

Мой тесть был на Serracor-NK и Serra RX около 4 месяцев или

так. У него фиброз легких, проблемы с дыханием, он должен быть на

Кислород и легко устает.С тех пор, как он был на вашей продукции, ему пришлось

использует кислород все меньше и меньше, чувствует себя лучше и дышит лучше

тоже. В целом он намного лучше. Доктора только прописали стероиды, а они

мало что помогло. Врач более или менее отказался от его улучшения, поэтому мы

попробовали ваши продукты и получили действительно хорошие результаты и будут продолжать принимать

их тоже. Спасибо за альтернативу, потому что я действительно верю, что он мог бы

не было бы здесь, если бы тебя не было здесь.

Спасибо Стиву

Три года назад мне сделали операцию по удалению очень большой миомы. Моя матка на

к тому времени выросла до 24 недель беременности. Через два года после

операции Я заметил, что мои месячные стали более тяжелыми, и у меня началось

прибавляет в весе. Я прошла обследование органов малого таза и УЗИ и обнаружила, что новый

миомы. Я начал поиск натуральных средств лечения

и нашел информацию об использовании серрапептазы для уменьшения миомы.Я

нашел веб-сайт Biomedic Labs и прочитал отзывы о

Успех при миоме. Я был на упаковке миомы на шесть

недели и уже заметили разницу в своем здоровье. Беру

рекомендуемые дозы для уменьшения миомы, регулярно занимайтесь спортом и ешьте

здоровее. Моя тазовая боль утихла, и мои последние месячные были легче, чем

было в месяцах. Я абсолютно рекомендую пакет fibroid для

всем, кому нужно лечить миому.Хотел бы я знать об этих

продуктов до операции три года назад.

J.K.

Я начал рекомендованную дозировку 8-7-2010 и 262-2011 я

отпраздновал 29 недель этого замечательного альтернативного лечения легких

фиброз. Я перенесла операцию по поводу рака легких 14.05.2010, и у меня половина нижних

удалена правая доля, операция также подтвердила, что у меня легочная

фиброз.Мне назначили преднизон из-за фиброза, но побочных эффектов было

настолько хорош, что я решил, что лучше умру, чем буду продолжать. Я верю

Бог вмешался и предложил мне поискать в Интернете

эффективных альтернативных метода лечения — и я попал на веб-сайт BioMedic Labs

и заказал их комплект для лечения фиброза — Serracor & Serra. В результате

операции и потеря половины правой нижней доли — по оценкам врачей, я

потерял от 18 до 20% всей моей функции легких — это становится важным, когда вы

увидит.Вскоре после операции, 8 апреля 2010 г. я перенесла легочную

(дыхательный тест), который показал, что мой ОФВ1 (L) был 67% от

предсказано. Ранее проверка дыхания показала, что объем моих легких

около 60% от прогнозируемого. 23.11.2010 я прошел еще один тест на дыхание и

число FELI (L) увеличилось до 82% от прогнозируемого. Так что для меня это было

100% того, что я мог ожидать из-за потери от 18 до 20% объема легких.

Прогнозируемые числа в тесте функции легких предполагают, что у человека

физически не потерял емкость легких. Таким образом, число 82% было ОТЛИЧНЫМ — истинное значение

ответ на лечение ферментами и молитву. Я должен был спать с кислородом до

несколько недель лечения ферментами — тогда мой уровень кислорода был таким, что

Мне больше не нужно было спать с кислородом, и я отправил кислородное оборудование

обратно поставщику. Сегодня, если я не сделаю что-нибудь действительно напряженное — я действительно

не чувствую одышки, и я снова чувствую себя нормально.Я

старше 70 лет, и теперь я вернулся к теннису, пикелболу, велоспорту и

катание на лыжах. Я намерен оставаться на их полной дозировке, как рекомендовано в течение 270 дней

, а затем снизьте до рекомендованного уровня обслуживания. Биомедицинские лаборатории и

их пучок фиброза — верный ответ на молитву. Спасибо Bio Medic Labs

для вас продукты и исследования. Я чувствую, что мой фиброз в основном

исчез. Если кому-то нужна от меня дополнительная информация, звоните по номеру

свяжитесь со мной по адресу — tedmillard @ yahoo.com.

Т. Миллард

Этот продукт спас мне жизнь. У меня фибромиалгия, что всегда было плохо, но

После облучения в качестве лечения рака груди у меня были такие сильные боли, что я

думал о самоубийстве. Я каждую ночь плакал, ходил по полу и

качается от боли, и я действительно не слабак. Через месяц Serracor-NK, 2 3X

в день, у меня НЕ было боли. С тех пор я принимаю по два в день в качестве обслуживания. У меня

рекомендовал его друзьям с фибромиалгией и ревматоидным артритом

, и он всегда работал.Спасибо Спасибо! Карен

простейших крови и тканей | Basicmedical Key

52

Кровь и ткани Protozoa

СОДЕРЖАНИЕ ГЛАВЫ

ВВЕДЕНИЕ

Важные с медицинской точки зрения организмы в этой категории простейших 9000 Toplasma5 и Plorozo6000 состоят из 000 и жгутиконосцы Trypanosoma и Leishmania. Pneumocystis обсуждается в этой книге как простейшее, поскольку считается таковым с медицинской точки зрения.Однако молекулярные данные показывают, что он связан с дрожжами, такими как Saccharomyces cerevisiae . Таблица 51–2 суммирует несколько важных характеристик этих простейших в крови и тканях.

Важные с медицинской точки зрения стадии жизненного цикла простейших в крови и тканях описаны в Таблице 52–1.

ТАБЛИЦА 52–1 Важные с медицинской точки зрения стадии жизненного цикла простейших в крови и тканях

ПЛАЗМОД

Болезнь

Малярия вызывается четырьмя плазмодиями плазмодия, плазмодия плазмодия: 9000ivium и Plasmodium falciparum.P. vivax и P. falciparum являются более частыми причинами малярии, чем P. ovale и P. malariae . Во всем мире малярия является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний и основной причиной смерти.

Важные свойства

Жизненный цикл видов Plasmodium показан на рис. 52–1. Переносчиком и окончательным хозяином для плазмодий является самка Anopheles mosquito (только самка принимает пищу с кровью).В жизненном цикле есть две фазы: половой цикл, который происходит в основном у комаров, и бесполый цикл, который происходит у людей, промежуточных хозяев. ¹

РИСУНОК 52–1 Plasmodium видов. Жизненный цикл. Правая часть рисунка описывает стадии внутри человека (синие стрелки). Цикл A (вверху справа) — это стадия экзоэритроцитов, которая происходит в печени. Цикл B (внизу справа) — это стадия эритроцитов, которая происходит в красных кровяных тельцах.Обратите внимание, что на этапе 6 цикла мерозоиты, высвобождаемые из разорванных шизонтов, затем заражают другие эритроциты. Синхронизированное высвобождение мерозоитов вызывает периодическую лихорадку и озноб, характерные для малярии. Левая часть рисунка описывает стадии у комара (красные стрелки). Люди заражаются на этапе 1, когда комар вводит спорозоиты. Комар заражается на этапе 8, когда комар заглатывает гаметоциты в крови человека. (Поставщик: Центры по контролю и профилактике заболеваний / д-р Александр Дж.да Силва и Мелани Мозер.)

Половой цикл называется спорогонией , потому что образуются спорозоиты (спорогонический цикл обозначен буквой C на рис. 52-1), а бесполый цикл называется шизогонией , потому что образуются шизонты.

Жизненный цикл человека начинается с попадания спорозоитов в кровь из слюны кусающего комара. Спорозоиты поглощаются гепатоцитами в течение 30 минут. Эта «экзоэритроцитарная» фаза (обозначенная буквой A на рис. 52–1) состоит из размножения и дифференцировки клеток в мерозоитов . P. vivax и P. ovale продуцируют скрытую форму ( гипнозоит, ) в печени; эта форма является причиной рецидивов малярии vivax и ovale.

Мерозоиты выделяются из клеток печени и инфицируют эритроциты. Во время эритроцитарной фазы (обозначенной буквой B на рис. 52–1) организм дифференцируется в трофозоит в форме кольца (рис. 52–2A, B и 52–3). Кольцевая форма перерастает в амебоидную форму, а затем дифференцируется в шизонт, заполненный мерозоитами (рис. 52–2C).После высвобождения мерозоиты инфицируют другие эритроциты (шаг 6 на рис. 52–1). Этот цикл в красных кровяных тельцах повторяется через равные промежутки времени, характерные для каждого вида. Периодическое выделение мерозоитов вызывает типичные повторяющиеся симптомы озноба, лихорадки и потоотделения, наблюдаемые у больных малярией.

РИСУНОК 52–2 A: Plasmodium vivax трофозоит в виде кольца-печатки в эритроците. B: Plasmodium vivax амебоидный трофозоит внутри эритроцита, с точками Шуффнера. C: Plasmodium vivax зрелый шизонт с мерозоитами внутри. D: Plasmodium vivax микрогаметоцит. E: Макрогаметоцит Plasmodium vivax . F: Plasmodium falciparum «банановидный» гаметоцит с прикрепленным призраком эритроцитов. G: Toxoplasma gondii трофозоитов в макрофагах. H: Кисты Pneumocystis jiroveci . (A – G, 1200 ×; H, 800 ×.)

РИСУНОК 52–3 Plasmodium falciparum — трофозоит в форме кольца.Длинная стрелка указывает на эритроцит, содержащий трофозоит в форме кольца. Стрелка указывает на эритроцит, содержащий четыре кольцевидных трофозоита. Обратите внимание на очень высокий процент эритроцитов, содержащих кольцевые формы. Эта паразитемия высокого уровня чаще встречается при инфекции Plasmodium falciparum , чем при инфицировании другими плазмодиями. (Рисунок любезно предоставлен доктором С. Гленном, Библиотека изображений общественного здравоохранения, Центры по контролю и профилактике заболеваний.)

Половой цикл начинается в эритроцитах человека, когда одни мерозоиты развиваются в мужские, а другие — в женские гаметоциты (рисунки 52–2). 2D на F и 52–4, а шаг 7 на рис. 52–1).Красные кровяные тельца, содержащие гаметоциты, попадают в организм самки комара Anopheles и в ее кишечнике продуцируют макрогамету самки и восемь микрогамет, подобных сперматозоидам. После оплодотворения диплоидная зигота дифференцируется в подвижную оокинету, которая проникает в стенку кишечника, где она превращается в ооцисту, внутри которой продуцируется множество гаплоидных спорозоитов. Спорозоиты высвобождаются и мигрируют в слюнные железы, готовые завершить цикл, когда комар примет свою следующую пищу с кровью.

РИСУНОК 52–4 Plasmodium falciparum —гаметоцит. Стрелка указывает на гаметоцит в форме банана Plasmodium falciparum . (Рисунок любезно предоставлен доктором С. Гленном, Библиотека изображений общественного здравоохранения, Центры по контролю и профилактике заболеваний.)

Очень важной особенностью P. falciparum является устойчивость к хлорохину . Штаммы, устойчивые к хлорохину, сейчас преобладают в большинстве регионов мира, где малярия является эндемической.Устойчивость к хлорохину опосредуется мутацией в гене, кодирующем переносчик хлорохина в клеточной мембране организма.

Патогенез и эпидемиология

Большинство патологических проявлений малярии возникают в результате разрушения эритроцитов . Эритроциты разрушаются как за счет высвобождения мерозоитов, так и за счет действия селезенки, чтобы сначала изолировать инфицированные эритроциты, а затем лизировать их. Увеличение селезенки, характерное для малярии, происходит из-за скопления синусоидов эритроцитами в сочетании с гиперплазией лимфоцитов и макрофагов.

Малярия, вызываемая P. falciparum , на более серьезна , чем малярия, вызываемая другими плазмодиями. Он характеризуется инфицированием гораздо большего количества эритроцитов, чем другие виды малярии, и закупоркой капилляров агрегатами паразитированных эритроцитов. Это приводит к опасному для жизни кровотечению и некрозу, особенно в головном мозге (церебральная малярия). Кроме того, происходит обширный гемолиз и повреждение почек, что приводит к гемоглобинурии. Темный цвет мочи пациента дал начало термину «черноводная лихорадка».«Гемоглобинурия может привести к острой почечной недостаточности.

Время цикла лихорадки составляет 72 часа для P. malariae и 48 часов для других плазмодиев. Заболевание, вызываемое P. malariae , называется четверной малярией, потому что она повторяется каждый четвертый день, тогда как малярия, вызванная другими плазмодиями, называется третичной малярией, поскольку она повторяется каждые три дня. Третичная малярия подразделяется на злокачественную малярию, вызываемую P. falciparum , и доброкачественную малярию, вызываемую P.vivax и P. ovale .

P. falciparum вызывает высокий уровень паразитемии, поскольку может инфицировать эритроциты любого возраста. Напротив, P. vivax инфицирует только ретикулоциты, а P. malariae заражает только зрелые эритроциты; следовательно, они производят гораздо меньшее количество паразитов в крови. Лица с серповидно-клеточными признаками (гетерозиготы) защищены от малярии, потому что их эритроциты обладают слишком низкой активностью АТФазы и не могут производить достаточно энергии, чтобы поддерживать рост паразита.Люди с гомозиготной серповидноклеточной анемией также защищены, но редко живут достаточно долго, чтобы получить большую пользу.

Рецептором P. vivax является антиген группы крови Даффи. Люди, гомозиготные по рецессивным генам, кодирующим этот белок, устойчивы к инфекции P. vivax . Более 90% чернокожих западноафриканцев и многие из их американских потомков не продуцируют антиген Даффи и, таким образом, устойчивы к малярии vivax.

Люди с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (G6PD) также защищены от тяжелых последствий малярии falciparum.Дефицит G6PD — это Х-связанная гемоглобинопатия, которая часто встречается в тропических регионах, где малярия является эндемической. И мужские, и женские носители мутировавшего гена защищены от малярии.

Малярия передается главным образом через укусы комаров, но также происходит передача через плаценту, при переливании крови и при внутривенном употреблении наркотиков.

Частичный иммунитет на основе гуморальных антител, которые блокируют проникновение мерозоитов в эритроциты, встречается у инфицированных людей.Результат — низкий уровень паразитемии и слабовыраженные симптомы; это состояние известно как premunition . Напротив, неиммунный человек, например, впервые посетивший местность, где малярия falciparum является эндемической, подвергается риску тяжелого, опасного для жизни заболевания.

Более 200 миллионов человек во всем мире болеют малярией, и более 1 миллиона умирают от нее каждый год, что делает ее наиболее распространенным смертельным инфекционным заболеванием. Это происходит в основном в тропических и субтропических регионах, особенно в Азии, Африке, Центральной и Южной Америке.Малярия в США наблюдается у американцев, которые путешествуют в районы эндемической инфекции без адекватной химиопрофилактики, а также у иммигрантов из районов эндемической инфекции. Это не эндемический вид в Соединенных Штатах. Некоторые регионы Юго-Восточной Азии, Южной Америки и Восточной Африки особенно страдают от устойчивых к хлорохину штаммов P. falciparum . Людям, которые жили или путешествовали в районах, где распространена малярия, следует обращаться за медицинской помощью при лихорадочных заболеваниях в течение 3 лет после того, как они покинули малярийные районы.

Клинические результаты

Малярия проявляется внезапным появлением лихорадки и озноба, сопровождающимся головной болью, миалгиями и артралгиями, примерно через 2 недели после укуса комара. Лихорадка может быть постоянной в начале болезни; типичный периодический цикл не развивается в течение нескольких дней после начала. Пик лихорадки, которая может достигать 41 ° C, часто сопровождается дрожащим ознобом, тошнотой, рвотой и болями в животе. Лихорадка сменяется обильным потом. Пациенты обычно чувствуют себя хорошо между приступами лихорадки.Спленомегалия наблюдается у большинства пациентов, а гепатомегалия — примерно у одной трети. Анемия выражена.

Необработанная малярия, вызванная P. falciparum , потенциально опасна для жизни в результате обширного поражения мозга (церебральная малярия) и почек (черная вода). Малярия, вызываемая тремя другими плазмодиями, обычно проходит самостоятельно с низким уровнем смертности. Однако рецидивы малярии P. vivax и P. ovale могут возникать в течение нескольких лет после первоначального заболевания в результате действия гипнозоитов, латентных в печени.

Лабораторная диагностика

Диагностика основывается на микроскопическом исследовании крови с использованием мазков, окрашенных по Гимзе толщиной и толщиной. Толстый мазок используется для выявления присутствия организмов, а тонкий мазок используется для определения видов. Важно идентифицировать вид, потому что обращение с разными видами может отличаться. Кольцеобразные трофозоиты можно увидеть в инфицированных эритроцитах (рис. 52–3). Гаметоциты P.falciparum , имеют форму полумесяца , («банановую»), тогда как у других плазмодиев имеют сферическую форму (рис. 52–2F). Если паразитировано более 5% эритроцитов, обычно ставится диагноз P. falciparum — малярия.

Если мазки крови не позволяют установить диагноз, можно провести анализ нуклеиновых кислот Plasmodium на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) или иммуноферментный анализ (ELISA) на белок, специфичный для P. falciparum . быть полезным.

Лечение

Лечение малярии сложно, и подробности выходят за рамки этой книги. В таблице 52–2 представлены препараты, обычно используемые в США. Основными критериями выбора конкретных лекарств являются тяжесть заболевания и устойчивость организма к хлорохину. Устойчивость к хлорохину определяется не лабораторными исследованиями, а географическим положением заражения.

ТАБЛИЦА 52–2 Лекарства, обычно используемые для лечения малярии в США

Хлорохин — препарат выбора для лечения неосложненной малярии, вызываемой видами non-falciparum, в районах без устойчивости к хлорохину.Хлорохин убивает мерозоиты, тем самым уменьшая паразитемию, но не влияет на гипнозоиты P. vivax и P. ovale в печени. Их убивает примахин, который необходимо использовать для предотвращения рецидивов. Примахин может вызывать тяжелый гемолиз у людей с дефицитом G6PD, поэтому перед назначением препарата следует провести тестирование на этот фермент. Примахин не следует назначать пациенту с серьезным дефицитом G6PD. Если примахин не назначается, можно подождать, чтобы увидеть, вернутся ли симптомы, а затем лечить хлорохином.

Неосложненная, устойчивая к хлорохину Инфекция P. falciparum лечится либо Коартемом (артеметер плюс люмефантрин), либо Малароном (атоваквоном и прогуанилом). В тяжелых осложненных случаях малярии, вызванной устойчивостью к хлорохину, falciparum, используется внутривенное введение артесуната или хинидина.

За пределами США артемизинины, такие как артесунат или артеметер, широко используются в сочетании с другими противомалярийными препаратами. Артемизинины недороги и имеют мало побочных эффектов, и у большинства плазмодиев не выработалась устойчивость к этим лекарствам.Однако устойчивость к артесунату появилась у некоторых штаммов P. falciparum в Юго-Восточной Азии (например, Камбоджа, Мьянма и Таиланд).

Профилактика

Химиопрофилактика малярии для путешественников в районы, где устойчивый к хлорохину P. falciparum является эндемичным, состоит из мефлохина или доксициклина. Также можно использовать комбинацию атоваквона и прогуанила (Маларон) в фиксированной дозе. Хлорохин следует применять в районах, где присутствует P.falciparum чувствителен к этому препарату. Путешественники в районы, где обнаружены другие три плазмодия, должны принимать хлорохин, начиная с 2 недель до прибытия в эндемичную зону и продолжая в течение 6 недель после отъезда. После этого следует провести 2-недельный курс примахина, если воздействие было высоким. Примахин убивает гипнозоиты P. vivax и P. ovale .

Другие профилактические меры включают использование москитных сеток, оконных сеток, защитной одежды и репеллентов от насекомых.Комары питаются от заката до рассвета, поэтому защита особенно важна в ночное время. Коммунальные профилактические меры направлены против сокращения популяции комаров. Многие инсектицидные спреи, такие как ДДТ, больше не эффективны, потому что у комаров выработалась устойчивость. Осушение стоячей воды в болотах и ​​канавах сокращает площади гнездования. Вакцины нет.

ТОКСОПЛАЗМА

Болезнь

Toxoplasma gondii вызывает токсоплазмоз, включая врожденный токсоплазмоз.

Важные свойства

Жизненный цикл T. gondii показан на Рисунке 52–5. Окончательный хозяин — домашняя кошка , и другие представители семейства кошачьих; люди и другие млекопитающие являются промежуточными хозяевами. Заражение человека начинается с попадания цист в недоваренное мясо или от случайного контакта с цистами в кошачьих фекалиях. В тонком кишечнике цисты разрываются и высвобождают формы, которые проникают в стенку кишечника, где они поглощаются макрофагами и дифференцируются в быстро размножающиеся трофозоиты ( тахизоитов, ), которые убивают клетки и заражают другие клетки (рисунки 52–2G и 52 –6).Клеточный иммунитет обычно ограничивает распространение тахизоитов, и паразиты проникают в клетки-хозяева в головном мозге, мышцах и других тканях, где они развиваются в цисты, в которых паразиты медленно размножаются. Эти формы получили название брадизоитов . Эти тканевые кисты являются одновременно важным диагностическим признаком и источником микроорганизмов при разрыве тканевой кисты у пациента с ослабленным иммунитетом.

РИСУНОК 52–5 Toxoplasma gondii .Жизненный цикл. Верхние красные стрелки показывают естественный жизненный цикл, поскольку T. gondii циркулирует между кошками (№ 1), которые выделяют ооцисты с фекалиями, которые поедают мыши, а также домашние животные, такие как свиньи и овцы. Кисты образуются в тканях, таких как мышцы и мозг. Естественный цикл завершается, когда кошки едят мышей. Люди — случайные хозяева. Они могут заразиться при употреблении в пищу недоваренной свинины и баранины (синяя стрелка № 2), содержащих тканевые цисты в мышцах, или при приеме пищи, загрязненной кошачьими фекалиями, содержащими ооцисты (синяя стрелка № 3).(Поставщик: Центры по контролю и профилактике заболеваний / д-р Александр Дж. Да Силва и Мелани Мозер.)

РИСУНОК 52–6 Toxoplasma gondii — тахизоит. Стрелка указывает на тахизоит T. gondii в сердечной мышце. (Рисунок любезно предоставлен доктором Э. Юингом младшим, Библиотека изображений общественного здравоохранения, Центры по контролю и профилактике заболеваний.)

Цикл внутри кошки начинается с проглатывания цист сырого мяса (например, мышей). Брадизоиты высвобождаются из кист тонкого кишечника, заражают клетки слизистой оболочки и дифференцируются на мужские и женские гаметоциты, гаметы которых сливаются с образованием ооцистов, которые выделяются с фекалиями кошек.Цикл завершается, когда почва, загрязненная кошачьими фекалиями, случайно попадает в организм. Заражение человека обычно происходит в результате употребления в пищу недоваренного мяса (например, баранины и свинины) животных, которые паслись на почве, зараженной инфицированными кошачьими фекалиями.

Патогенез и эпидемиология

T. gondii обычно приобретается при проглатывании цист сырого мяса или кошачьих фекалий.

Также происходит трансплацентарная передача от инфицированной матери к плоду.Передача от человека к человеку, кроме трансплацентарной передачи, не происходит. После инфицирования кишечного эпителия микроорганизмы распространяются на другие органы, особенно в мозг, легкие, печень и глаза. Развитие инфекции обычно ограничивается компетентной иммунной системой. Клеточно-опосредованный иммунитет играет главную роль, но циркулирующие антитела усиливают уничтожение организма. Большинство начальных инфекций протекают бессимптомно. При содержании организмы сохраняются в тканях в виде кист.Воспаления нет, и человек остается здоровым, если иммуносупрессия не позволяет активировать микроорганизмы в кистах.

Врожденное инфицирование плода происходит только , когда мать инфицирована во время беременности. Если она заразится до беременности, организм будет в форме кисты, и трофозоиты не пройдут через плаценту. Мать, которая повторно заразилась во время беременности, но у которой есть иммунитет от предыдущей инфекции, не передаст этот организм своему ребенку.Примерно одна треть матерей, инфицированных во время беременности, рожает инфицированных младенцев, но только у 10% этих младенцев имеются симптомы.

Заражение T. gondii происходит во всем мире. Серологические исследования показывают, что в США антитела обнаруживаются у 5-50% людей в различных регионах. Инфекция обычно носит спорадический характер, но случаются вспышки, связанные с употреблением сырого мяса или зараженной воды. Примерно 1% домашних кошек в США выделяют цист Toxoplasma .

Клинические результаты

Большинство первичных инфекций у иммунокомпетентных взрослых протекает бессимптомно, но некоторые из них напоминают инфекционный мононуклеоз, за ​​исключением того, что тест на гетерофильные антитела отрицательный. Врожденная инфекция может привести к аборту, мертворождению или неонатальному заболеванию с энцефалитом, хориоретинитом , и гепатоспленомегалией. Также наблюдаются лихорадка, желтуха и внутричерепных кальцификатов . Большинство инфицированных новорожденных протекает бессимптомно, но у некоторых детей через несколько месяцев или лет разовьется хориоретинит или умственная отсталость.Врожденное инфицирование Toxoplasma является одной из основных причин слепоты у детей. У пациентов со сниженным клеточным иммунитетом (например, у пациентов с синдромом приобретенного иммунодефицита [СПИД]) возникает опасное для жизни диссеминированное заболевание, в первую очередь энцефалит.

Лабораторная диагностика

Для диагностики острых и врожденных инфекций используется иммунофлуоресцентный анализ на антитело IgM . IgM используется для диагностики врожденной инфекции, потому что IgG может иметь материнское происхождение.Тесты на антитела IgG могут использоваться для диагностики острых инфекций, если наблюдается значительный рост титра антител в парных сыворотках.

Микроскопическое исследование препаратов, окрашенных по Гимзе, выявляет трофозоиты в форме полумесяца во время острых инфекций. В тканях можно увидеть кисты. Организм можно выращивать в культуре клеток. Прививка мышам может подтвердить диагноз.

Лечение

Врожденный токсоплазмоз, будь то симптоматический или бессимптомный, следует лечить с помощью комбинации сульфадиазина и пириметамина.Эти препараты также представляют собой предпочтительное лечение диссеминированного заболевания у пациентов с ослабленным иммунитетом. Острый токсоплазмоз у иммунокомпетентного человека обычно купируется самостоятельно, но любого пациента с хориоретинитом следует лечить.

Профилактика

Самый эффективный способ предотвращения токсоплазмоза — это тщательно приготовить мясо, чтобы убить цисты. Беременным женщинам следует быть особенно осторожными, чтобы не допустить недоваренного мяса и контакта с кошачьими фекалиями. Им не следует опорожнять кошачьи туалеты.Кошек нельзя кормить сырым мясом. Триметоприм-сульфаметоксазол используется для профилактики энцефалита Toxoplasma у пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).

ПНЕВМОЦИСТ

Болезнь

Pneumocystis jiroveci является важной причиной пневмонии у лиц с ослабленным иммунитетом. В 2002 году таксономисты переименовали человеческий вид Pneumocystis в P. jiroveci и рекомендовали использовать Pneumocystis carinii только для описания видов крыс Pneumocystis .

Важные свойства

Классификация и жизненный цикл Pneumocystis неясны. Многие аспекты его биохимии указывают на то, что это дрожжи, но он также имеет несколько атрибутов простейших. Анализ последовательностей рРНК, опубликованный в 1988 г., показывает, что Pneumocystis следует классифицировать как гриб , связанный с дрожжами, такими как Saccharomyces cerevisiae . Последующий анализ митохондриальной ДНК и различных ферментов подтверждает идею, что это гриб.Однако в его мембранах отсутствует эргостерин, как у грибов. В нем есть холестерин.

С медицинской точки зрения это все еще считается простейшим. В тканях он выглядит как киста, напоминающая цисты простейших (Рисунки 52–2H и 52–7). Выводы о том, что он не растет на грибковой среде и что противогрибковые препараты неэффективны, отсрочили принятие его классификации как грибка.

РИСУНОК 52–7 Pneumocystis jiroveci — стрелка указывает на кисту P.jiroveci в легочной ткани. (Рисунок любезно предоставлен доктором Э. Юингом-младшим, Библиотека изображений общественного здравоохранения, Центры по контролю и профилактике заболеваний.)

Только золотые участники могут продолжить чтение. Войдите или зарегистрируйтесь, чтобы продолжить

Нравится:

Нравится Загрузка …

Связанные

Как удалить волдыри с кровью на спине тела: варианты лечения

Трудно видеть вашу задницу.Обнаружить кровавый волдырь на спине практически невозможно без посторонней помощи, камеры или зеркала. Во-первых, вам нужно знать, чтобы проверить это, что может быть трудным, поскольку кровяные пузыри часто не вызывают боли. Он может уйти сам по себе, и вы не заметите этого. Или вы можете случайно щелкнуть его и обнаружить с запачканной рубашкой.

Как определить кровавый волдырь на спине

Эти пятна вызваны физической травмой. В частности, когда кожа защемлена, а самый верхний слой кожи отказывается ломаться, кровь будет скапливаться вместо кровотечения из ссадины.Это вызывает мешочек с кровью кожи. Иногда это крошечный круг, сравнимый с бусинкой, или бугристая крупная четверть. Цвета также могут меняться по мере заживления, темнея по мере заживления и оставляя корки. Если вы упали так же, как и получили травму, полезно проверить свою спину.

Как лечить волдыри с кровью

Лечение волдырей крови включает создание оптимальных условий для заживления. Вместо того, чтобы удалять их, лечите симптомы заболевания и подождите. Выталкивание может вызвать рубцевание или увеличить вероятность заражения.Что-то рискованное для региона, расположенного за пределами прямой линии (хотя вы можете заметить жар и зуд).

Обледенение может быть отличным методом. Оберните пакет со льдом (или замороженный горошек на самом деле нет) в полотенце или другую ткань, чтобы не замерзнуть. Держите его на инфицированном участке в течение двадцати минут несколько раз в день, как и другие компрессы. Сесть на матрас и лечь на него. Или попросите друга или смотрителя сделать это за вас. Более творчески вы можете привязать ее к спине с помощью тонкой повязки или удерживать ее на месте с помощью рубашки или худи.

Как предотвратить образование волдырей на спине

Кровяные пузыри в большинстве случаев образуются в результате физического защемления. Не хотите их? избегать травм. Это выходит за рамки избегания занятий спортом и падений. Также носите одежду, которая не подходит по размеру (особенно бюстгальтеры), и делайте это путем стягивания. Может быть, виноваты даже застежки. Рюкзаки, кошельки и ранцы, которые слишком тяжелые или не имеют надлежащей защиты на ремне или ремнях, также могут сделать это. Держите его достаточно свободным, здесь это не больно, и избегайте одного стянутого мешка с тяжелыми пакетами.Равномерное распределение груза может снизить давление. Кошельки и записные книжки тоже должны быть легкими.

Что делать, если у меня снова появляется волдырь с кровью?

Если он продолжает возвращаться или не двигается с места, дерматолог может решить, что слив метки — разумное решение. Возможно, это не волдырь, а неизвестная масса. Рак кожи иногда проявляется в появлении новых родинок или веснушек, некоторые из которых можно ошибочно принять за волдыри. Это может быть смертельно опасно, если вы продлите лечение раковых заболеваний.

Факты о меланоме

Немеланомные штаммы рака кожи существуют, но это вероятная причина. Оценки значений распространенности увеличиваются в течение года (это касается и оценки ожидаемых смертей). Случаи могут быть in situ (неинвазивный и ограниченный контроль в эпидермисе или на поверхности) или инвазивный (инвазивный и более глубоко проникающий в кожу в дерму).

Большинство случаев связано с воздействием ультрафиолетовых (УФ) лучей. Это подходящий термин для обозначенной полосы электромагнитного спектра с диапазоном длин волн от 400 до 10 нм.Он также находится между видимым светом и рентгеновскими лучами. Около десятой части всего солнечного света составляет УФ. Выход солнца радиоактивен. Избегание солнцезащитного крема или намеренное получение солнечного ожога для загара могут значительно повысить ваши шансы на это. И да, солярии тоже опасны.

Как удалить опухоль

В зависимости от диаметра и цвета опухоли. Его можно биопсировать или удалить. Большинство опухолей доброкачественные, хотя иссечение после удаления предложит исследование конкретных клеток, чтобы увидеть природу ткани.Может применяться местная анестезия, так как для большинства процедур вам не нужно спать. Вы будете бодрствовать, поскольку они аккуратно срежут интересную шишку с нормальной ткани скальпелем. Онемение не позволит вам ничего чувствовать, а наложение нескольких швов поможет заживлению разреза. Если он больше или связан с более важными структурами, такими как органы, вас могут вырубить более сильным анестетиком. Чтобы разрез снова срастался, может потребоваться больше времени. Хирург знает, как его удалить в вашем случае.

Всегда ли эти аномалии злокачественны?

Нет, часто эти опухоли — это просто скопление жировых отложений на губах, которые решили странным образом расти. Они безвредны, распространены и легко удаляются. Ученые не уверены, что заставляет организм вести себя подобным образом, но на это влияет комбинация ДНК или факторов окружающей среды. Не волнуйтесь, даже если результаты анализов изначально положительные, высока вероятность ошибки, поэтому врачи выбирают несколько анализов, прежде чем начать химиотерапию или операцию.

Ссылки на статьи:

1. https://www.webmd.com/skin-problems-and-treatments/ss/slideshow-blisters
2. https://www.webmd.com/melanoma-skin-cancer/default.htm

Чем плазма крови отличается от тканевой жидкости?

Анатомия и физиология

Наука

• Анатомия и физиология
• Астрономия
• Астрофизика
• Биология
• Химия
• науки о Земле
• Наука об окружающей среде
• Органическая химия
• Физика

Математика

• Алгебра

Извлечение ДНК из крови | Thermo Fisher Scientific

Связанная информация о продукте

Наборы для очистки гДНК ChargeSwitch ^® позволяют быстро и эффективно очищать геномную ДНК из небольших объемов крови человека.После приготовления лизатов вы можете очистить ДНК менее чем за 15 минут с помощью технологии ChargeSwitch ^® . В зависимости от используемого набора образцы могут обрабатываться индивидуально или в автоматизированной системе с использованием робота для работы с жидкостью.

Предполагаемое использование наборов

Наборы крови ChargeSwitch ^® gDNA предназначены для выделения геномной ДНК из следующих количеств свежей или замороженной крови человека, обработанной антикоагулянтом EDTA или цитратом.Очищенная геномная ДНК подходит для использования в последующих приложениях, включая ПЦР, расщепление рестрикционными ферментами и Саузерн-блоттинг.

• ChargeSwitch ^® гДНК 20 мкл Наборы для крови: очищает до 600 нг геномной ДНК из 10–20 мкл крови человека.
• ChargeSwitch ^® гДНК 100 мкл Набор для крови: очищает до 3 мкг геномной ДНК из 50–100 мкл крови человека.
• ChargeSwitch ^® гДНК 1 мл Набор для крови: очищает до 20 мкг геномной ДНК из 1 мл крови человека

Важно: Геномная ДНК может быть выделена из крови, обработанной гепарином; однако ДНК не подходит для использования в последующих приложениях, таких как ПЦР, из-за присутствия гепарина.

Преимущества

Использование ChargeSwitch ^® gDNA Blood Kits для выделения геномной ДНК обеспечивает следующие преимущества:
Использует технологию на основе магнитных шариков для выделения геномной ДНК без использования опасных химикатов, центрифугирования или вакуумных коллекторов

• Быстрая и эффективная очистка геномной ДНК из образцов крови менее чем за 15 минут после подготовки образцов и лизиса
• Простой лизис с протеиназой К без необходимости механического лизиса
• Минимальное загрязнение РНК
• Очищенная геномная ДНК демонстрирует улучшенные последующие характеристики в приложениях, включая ПЦР, расщепление рестрикционными ферментами и Саузерн-блоттинг
• Включает набор, предназначенный для автоматизированной обработки большого количества образцов по 50-100 мкл в 96-луночных планшетах с использованием робота для работы с жидкостями

Технические характеристики системы

Исходный материал:	Варьируется; оптимизирован для небольших объемов образцов (т.е.е. 10-20 мкл или 50-100 мкл или 1 мл)
Объем элюирования:	100 мкл (набор 20 мкл), 150 мкл (набор 100 мкл) и 300 мкл (набор 1 мл)
Выход ДНК:	До 600 нг (набор 20 мкл), 3 мкг (набор 100 мкл) и 20 мкг (набор 1 мл)
Размер ДНК:	Зависит (зависит от качества исходного материала)

ChargeSwitch ^® Технология

Технология ChargeSwitch ® (CST ® ) — это новая технология на основе магнитных шариков, которая обеспечивает переключаемый поверхностный заряд в зависимости от pH окружающего буфера для облегчения очистки нуклеиновых кислот.В условиях низкого pH гранулы CST ® имеют положительный заряд, который связывает отрицательно заряженный остов нуклеиновой кислоты (см. Рисунок). Белки и другие загрязнители не связываются и просто смываются водным промывочным буфером. Для элюирования нуклеиновых кислот заряд на поверхности шарика нейтрализуется повышением pH до 8,5 с использованием буфера для элюирования с низким содержанием соли (см. Рисунок ниже). Очищенная ДНК мгновенно элюируется в этот буфер для элюции и готова к использованию в последующих приложениях.

ChargeSwitch ^® Характеристики магнитного шарика

Обвязка борта:	5-10 мкг геномной ДНК на мг
Размер бусины:	<1 мкм
Концентрация гранул:	25 мг / мл
Буфер хранения:	10 мМ MES, pH 5.0, 10 мМ NaCl, 0,1% Твин 20

Материалы, предоставляемые пользователем

Помимо реагентов, поставляемых с набором, перед началом работы вам необходимо иметь под рукой следующие материалы:

• Стойка для магнитной сепарации, подходящая для использования с 1,5 мл микроцентрифужными пробирками или 96-луночными планшетами
• Стерильные микроцентрифужные пробирки 1,5 мл
• 96 x 2 мл глубоколуночный планшет (при обработке образцов в 96-луночном формате; Greiner, каталожный номер.780270, Abgene, № по каталогу AB-0932 или аналог)
• 96 x 300 мкл микротитровальный планшет U-Bottomed (при обработке образцов в 96-луночном формате; Greiner, каталожный номер 650201 или аналогичный)
• Вихревой смеситель
• 20 мкл, 200 мкл и 1 мл стерильные наконечники для пипеток

MagnaRack ™ MagnaRack ™ (каталожный № CS15000) представляет собой стойку для магнитного разделения, состоящую из двух частей, для использования в протоколах с магнитными шариками, и состоит из магнитной базовой станции и съемной стойки для пробирок.Штатив для пробирок вмещает до 24 микроцентрифужных пробирок. Штатив для пробирок устанавливается на магнитную базовую станцию ​​в двух различных положениях, связывая ряд из 12 неодимовых магнитов с одним рядом из 12 трубок для простой обработки пробы «на магните» и «вне магнита».

96-луночный магнитный сепаратор

96-луночный магнитный сепаратор представляет собой стойку для магнитного разделения, которая может вместить до 96 образцов в планшете с глубокими лунками.Планшет с глубокими лунками устанавливается на магнитную базовую станцию, связывая массив из 24 неодимовых магнитов с образцами для обработки образцов «на магните» и «вне магнита» (см. Рисунки ниже).

Обращение с магнитными шариками ChargeSwitch ^®

Следуйте приведенным ниже инструкциям при обращении с магнитными шариками ChargeSwitch ^® .

• Не замораживайте бусинки, так как это их непоправимо повредит. Храните шарики при комнатной температуре.
• Всегда держите шарики в растворе. Не позволяйте им высыхать, так как это сделает их нефункциональными.
• При использовании шариков тщательно ресуспендируйте их в буфере для хранения, встряхивая перед удалением.
• Выбросьте шарики после использования. Не использовать повторно.

Буфер для элюирования
ChargeSwitch ^® Буфер для элюирования (E5; 10 мМ трис-HCl, pH 8.5) поставляется с набором для элюирования ДНК из магнитных шариков ChargeSwitch ^® . Для достижения наилучших результатов используйте буфер для элюции (E5) для элюирования ДНК. В качестве альтернативы можно использовать буфер TE с pH 8,5-9,0. Обратите внимание, что pH должен быть в пределах 8,5-9,0, иначе ДНК не будет элюироваться. Не используйте воду для элюирования.

Протокол предлагает элюировать геномную ДНК в 100 мкл (образец 10-20 мкл) или 150 мкл (образец 50-100 мкл) буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5).Вы можете изменять количество буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5), используемого для получения геномной ДНК в желаемой конечной концентрации. Для достижения наилучших результатов всегда используйте объем буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5), который равен или превышает объем магнитных шариков ChargeSwitch®, используемых в протоколе. Если объем буфера для элюирования ChargeSwitch® (E5) меньше объема используемых шариков, элюция ДНК не завершена. Возможно, вам потребуется выполнить второе элюирование, чтобы восстановить всю ДНК.

Автоматическая обработка жидкостей
Использование ChargeSwitch ^® gDNA 20 мкл набора крови было продемонстрировано на роботизированной рабочей станции Tecan Genesis® для очистки ДНК в полностью автоматизированной системе из большого количества образцов крови 10-20 мкл в 96-луночный формат. Подходят и другие роботы для работы с жидкостями при условии, что каждый из них оснащен захватным рычагом, 96-луночным магнитным сепаратором и другим дополнительным оборудованием, как описано. В этом руководстве представлены общие рекомендации и протокол, которые можно использовать для разработки сценария для вашего робота.Genesis® является зарегистрированным товарным знаком Tecan AG Group .

ChargeSwitch ^® гДНК Набор для крови

Продукт	Количество очисток	Кат.
ChargeSwitch ® gDNA 20 мкл Набор для крови	96 960	CS11010 CS11010-10
ChargeSwitch ® гДНК 100 мкл Набор для крови	50	CS11000
ChargeSwitch ® гДНК 1 мл Набор для крови	20	CS11001

Транспортировка и хранение

Все компоненты набора крови ChargeSwitch ^® gDNA поставляются при комнатной температуре.По получении храните протеиназу К при 4 ° C. Все остальные компоненты храните при комнатной температуре. При правильном хранении все компоненты имеют гарантию стабильности в течение 6 месяцев.

Содержание

Компоненты	Каталожный номер.
	CS11010	CS11000	CS11010-10
ChargeSwitch ® Буфер для лизиса (L12)	100 мл	100 мл	2 х 480 мл
ChargeSwitch ® Магнитные бусины	2 х 1 мл	2 х 1 мл	2 х 10 мл
Протеиназа К (20 мг / мл в 50 мМ трис-HCl, pH 8.5, 5 мМ CaCl 2 , 50% глицерина)	500 мкл	500 мкл	5 мл
ChargeSwitch ® Буфер для очистки (N5)	20 мл	20 мл	100 мл
ChargeSwitch Промывочный буфер ® (W12)	50 мл	100 мл	960 мл
ChargeSwitch ® Буфер для элюции (E5; 10 мМ трис-HCl, pH 8.5)	15 мл	15 мл	100 мл

ChargeSwitch ^® gDNA 1 мл Набор для крови (CS11001)

Транспортировка и хранение

Все компоненты ChargeSwitch ^® gDNA 1 мл Blood Kit поставляются при комнатной температуре. По получении храните протеиназу К при 4 ° C.Все остальные компоненты храните при комнатной температуре.
Стабильность всех компонентов при правильном хранении составляет 6 месяцев.

Содержимое

Компоненты, входящие в комплект для крови ChargeSwitch ^® gDNA 1 мл, перечислены ниже. Поставляемых реагентов достаточно для проведения 20 очисток из 1 мл проб крови.

Примечание: Некоторые реагенты в наборе могут быть превышены в необходимом количестве.

ChargeSwitch ^® гДНК Набор для крови

Компонент	Сумма
ChargeSwitch ® 10X буфер для лизиса эритроцитов (L8)	25 мл
ChargeSwitch ® Буфер для лизиса лейкоцитов (L12)	30 мл
ChargeSwitch ® Магнитные бусины	2 х 1 мл
Протеиназа К (20 мг / мл в 50 мМ трис-HCl, pH 8.5, 5 мМ CaCl 2 , 50% глицерина)	500 мкл
ChargeSwitch ® Буфер для очистки (N5)	4,5 мл
ChargeSwitch Промывочный буфер ® (W12)	100 мл
ChargeSwitch ® Буфер для элюции (E5; 10 мМ трис-HCl, pH 8.5)	10 мл

Протокол — очистка геномной ДНК из образцов крови 10-20 мкл

В этом разделе представлены рекомендации и инструкции по выделению геномной ДНК из 10-20 мкл образцов крови человека.Обратите внимание, что протокол оптимизирован для эффективной очистки ДНК из этих объемов образцов.

Исходный материал

Используйте эту процедуру для выделения геномной ДНК из образцов крови человека, которые были обработаны следующим образом:

• Объем: 10-20 мкл крови человека
• Лечение: лечение ЭДТА или цитратом
• Состояние образца: свежий или замороженный

Перед запуском

Перед началом выполните следующее:

1. Приготовьте смесь для лизиса: Для каждого образца смешайте 0.5 мл буфера для лизиса ChargeSwitch ^® (L12) и 5 ​​мкл протеиназы К для приготовления смеси для лизиса. Если вы выделяете ДНК из нескольких образцов, вы можете увеличить объем используемых реагентов и приготовить основную смесь для лизиса.
2. Перемешайте пробирку с магнитными шариками ChargeSwitch ^® на вортексе, чтобы полностью ресуспендировать и равномерно распределить шарики в буфере для хранения.
3. Приготовьте смесь для очистки: Для каждого образца смешайте 20 мкл магнитных шариков ChargeSwitch ^® (полностью ресуспендированных; см. Выше) и 100 мкл буфера для очистки ChargeSwitch ^® (N5), чтобы приготовить смесь для очистки.Если вы выделяете ДНК из нескольких образцов, вы можете увеличить объем используемых реагентов и приготовить основную смесь для очистки.

Подготовка лизата

Выполните описанную ниже процедуру, чтобы приготовить лизат из образца крови 10–20 мкл.

1. Перенесите образец крови 10–20 мкл в стерильную микроцентрифужную пробирку (или планшет с глубокими лунками 96 x 2 мл).
2. Добавьте 0,5 мл Lysis Mix (см. Выше) к образцу и аккуратно пипеткой вверх и вниз 5 раз перемешайте.

   Важно: Для перемешивания образца используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 450 мкл. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.

3. Инкубируйте образец при комнатной температуре в течение 10 минут или до тех пор, пока образец не станет прозрачным без видимых комков.
4. Перейти к связыванию ДНК.

Связывание ДНК

Следуйте приведенной ниже процедуре, чтобы привязать ДНК к магнитным шарикам ChargeSwitch ^® .

1. Осторожно пипетируйте вверх и вниз очищающую смесь, содержащую магнитные шарики ChargeSwitch ^® , чтобы полностью ресуспендировать шарики.
2. Добавьте 120 мкл очищающей смеси ChargeSwitch ^® к расщепленному образцу (из шага 3 выше) и осторожно пипетируйте 5 раз для перемешивания.
   
   Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 550 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.
3. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты, чтобы ДНК могла связываться с магнитными шариками ChargeSwitch ^® .
4. Поместите образец в MagnaRack ™ (или 96-луночный магнитный сепаратор, если используется 96-луночный планшет с глубокими лунками) на 1 минуту или до тех пор, пока шарики не сформируют плотный осадок.
5. Не вынимая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы (см. Рисунок).

6. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™. В пробирке не должно быть супернатанта.
7. Добавьте 500 мкл буфера для лизиса ChargeSwitch ^® (L12; без протеиназы К) в пробирку и осторожно пипеткой вверх и вниз 3 раза перемешайте. Используйте наконечник для пипетки объемом 1 мл, рассчитанный на 450 мкл.
8. Добавьте 50 мкл буфера для очистки ChargeSwitch ^® (N5) и аккуратно пипеткой вверх и вниз 3 раза перемешайте. Используйте наконечник пипетки на 1 мл, рассчитанный на 500 мкл.
9. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты.
10. Поместите образец в MagnaRack ™ (или 96-луночный магнитный сепаратор, если необходимо) на 1 минуту или до тех пор, пока шарики не сформируют плотный осадок.
11. Не вынимая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.
12. Немедленно переходите к разделу «Промывание ДНК» ниже.

Промывка ДНК

1. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™ (шаг 11, выше). В пробирке не должно быть супернатанта.
2. Добавьте 500 мкл промывочного буфера ChargeSwitch ^® (W12) к образцу и осторожно пипетируйте дважды вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.

   Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.

3. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.
4. Не вынимая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.
5. Перейти к выделению ДНК.

Выделение ДНК

1. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™ (шаг 4, выше).В пробирке не должно быть супернатанта.
2. Добавьте 100 мкл буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5) (или буфера TE, pH 8,5) к образцу и осторожно пипетируйте 10 раз вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.

   Важно: Не используйте воду для элюирования. ДНК не элюируется из-за плохой буферной способности воды.

3. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты.
4. Поместите образец в MagnaRack ™ на 3 минуты или до тех пор, пока шарики не образуют плотный осадок.
5. Не вынимая пробирку из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант, содержащий ДНК, в стерильную микроцентрифужную пробирку (или 96 x 300 мкл микротитровального планшета с U-образным дном). Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.
6. Выбросьте использованные магнитные шарики. Не используйте бусинки повторно.

Хранение ДНК

Храните очищенную ДНК при -20 ° C или сразу используйте для последующего анализа.Пустота многократно замораживает и размораживает ДНК.

Количественное определение выхода ДНК

Для количественного определения выхода вашей ДНК мы рекомендуем использовать набор для количественного определения дцДНК Quant-iT ™ PicoGreen ^® (каталожный номер P7589). Этот набор содержит реагенты, необходимые для чувствительного и точного определения на основе флуоресценции всего 25 пг / мл дцДНК с использованием реагента для количественного определения дцДНК Quant-iT ™ PicoGreen ^® .

Протокол — очистка геномной ДНК из образцов крови 50-100 мкл

В этом разделе представлены рекомендации и инструкции по выделению геномной ДНК из 50–100 мкл образцов крови человека.Обратите внимание, что протокол оптимизирован для эффективной очистки ДНК из этих объемов образцов.

Исходный материал Используйте эту процедуру для выделения геномной ДНК из образцов крови человека, которые были обработаны следующим образом:

• Объем: 50-100 мкл крови человека
• Лечение: лечение ЭДТА или цитратом
• Состояние образца: свежий или замороженный

Перед запуском Перед началом выполните следующее:

1. Приготовьте смесь для лизиса: Для каждого образца смешайте 1 мл буфера для лизиса ChargeSwitch ^® (L12) и 10 мкл протеиназы K, чтобы приготовить смесь для лизиса.Если вы выделяете ДНК из нескольких образцов, вы можете увеличить объем используемых реагентов и приготовить основную смесь для лизиса.


2. Перемешайте пробирку с магнитными шариками ChargeSwitch ^® на вортексе, чтобы полностью ресуспендировать и равномерно распределить шарики в буфере для хранения.


3. Приготовьте смесь для очистки: Для каждого образца смешайте 40 мкл магнитных шариков ChargeSwitch ^® (полностью ресуспендированных; см. Выше) и 200 мкл ДНК, выделенной из нескольких образцов, вы можете увеличить объем использованные реагенты и приготовьте основную смесь для очистки.

Подготовка лизата Выполните описанную ниже процедуру, чтобы приготовить лизат из 50–100 мкл образца крови.

1. Перенесите образец крови 50–100 мкл в стерильную микроцентрифужную пробирку или планшет с глубокими лунками 96 x 2 мл.


2. Добавьте 1 мл смеси для лизиса (см. Выше) к образцу и осторожно пипеткой вверх и вниз 5 раз перемешайте.

Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.
3. Инкубируйте образец при комнатной температуре в течение 10 минут или до тех пор, пока образец не станет прозрачным без видимых комков.


4. Перейти к связыванию ДНК.

Связывание ДНК Следуйте приведенной ниже процедуре, чтобы привязать ДНК к ChargeSwitch ^® Магнитные бусины.

1. Осторожно пипетируйте вверх и вниз очищающую смесь, содержащую магнитные шарики ChargeSwitch ^® , чтобы полностью ресуспендировать шарики.


2. Добавьте 240 мкл очищающей смеси ChargeSwitch ^® к расщепленному образцу (из шага 3, выше) и осторожно пипетируйте 5 раз, чтобы перемешать.

   Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.



3. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты, чтобы позволить ДНК связаться с магнитными шариками ChargeSwitch ^® .


4. Поместите образец в MagnaRack ™ (или 96-луночный магнитный сепаратор) на 1 минуту или до тех пор, пока шарики не сформируют плотный осадок.


5. Не извлекая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте.Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы (см. Рисунок).


6. Немедленно приступите к отмывке ДНК.

Промывка ДНК

1. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™ (шаг 5, выше). В пробирке не должно быть супернатанта.


2. Добавьте 1 мл промывочного буфера ChargeSwitch ^® (W12) к образцу и осторожно пипетируйте дважды вверх и вниз для ресуспендирования магнитных шариков.Для перемешивания используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл.


3. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.


4. Не извлекая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


5. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™.В пробирке не должно быть супернатанта.


6. Добавьте 1 мл буфера для лизиса ChargeSwitch ^® (L12; без протеиназы К) в пробирку и аккуратно пипеткой вверх и вниз 3 раза перемешайте. Для перемешивания используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл.


7. Добавьте 50 мкл буфера для очистки ChargeSwitch ^® (N5) и осторожно пипеткой вверх и вниз 3 раза перемешайте. Для перемешивания используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл.


8. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты.


9. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.


10. Не извлекая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


11. Удалите трубку с гранулированными магнитными шариками из MagnaRack ™.


12. Добавьте 1 мл промывочного буфера ChargeSwitch ^® (W12) в пробирку и осторожно пипетируйте дважды вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.Для перемешивания используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл.


13. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.


14. Не извлекая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


15. Перейти к выделению ДНК ниже.

Выделение ДНК

1. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™ (шаг 14, выше).В пробирке не должно быть супернатанта.


2. Добавьте 150 мкл буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5) (или буфера TE, pH 8,5) в пробирку и осторожно пипетируйте 10 раз вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.

   Важно: Не используйте воду для элюирования. ДНК не элюируется из-за плохой буферной способности воды.



3. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты.


4. Поместите образец в MagnaRack ™ на 3 минуты или до тех пор, пока шарики не образуют плотный осадок.


5. Не вынимая пробирку из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант, содержащий ДНК, в стерильную микроцентрифужную пробирку (или 96 x 300 мкл микротитровального планшета с U-образным дном). Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


6. Выбросьте использованные магнитные шарики. Не используйте бусинки повторно.

Хранение ДНК Храните очищенную ДНК при -20 ° C или сразу используйте для последующего анализа.Избегайте многократного замораживания и размораживания ДНК.

Количественное определение выхода ДНК Для количественного определения выхода вашей ДНК используйте Quant-iT ™ PicoGreen Набор для количественного определения дцДНК ^® (Каталожный номер P7589).

Протокол — Очистка геномной ДНК из 1 мл крови

В этом разделе представлены рекомендации и инструкции по выделению геномной ДНК из 1 мл образцов крови человека.

Исходный материал

Используйте эту процедуру для выделения геномной ДНК из:

• 1 мл обработанной ЭДТА или цитратом, свежей или замороженной, человеческой крови


• Бледное покрытие, эквивалентное 1 мл лейкоцитов

Подготовка 1X буфера для лизиса эритроцитов

При первом использовании набора подготовьте 1X буфер для лизиса RBC:

• Смешайте содержимое 10-кратного буфера для лизиса эритроцитов ChargeSwitch ^® (L8; 25 мл) с 225 мл стерильной воды для приготовления 1-кратного буфера для лизиса эритроцитов (общий объем = 250 мл).
• Используйте 1X RBC Lysis Buffer (см. «Подготовка лизата») или храните при комнатной температуре.

Подготовка лизата

Чтобы приготовить лизат из пробы крови объемом 1 мл, выполните описанную ниже процедуру.

1. В центрифужную пробирку на 15 мл добавьте 1 мл образца крови и 10 мл 1X буфера для лизиса эритроцитов.


2. Перемешайте, перевернув 5 раз, затем инкубируйте 5 минут при комнатной температуре, чтобы лизировать эритроциты.


3. Центрифугируйте образец в течение 5 минут при 2000 x g. Осторожно слейте супернатант, оставив осадок белой крови

Извлечение ДНК из крови | Thermo Fisher Scientific

Связанная информация о продукте

Наборы для очистки гДНК ChargeSwitch ^® позволяют быстро и эффективно очищать геномную ДНК из небольших объемов крови человека.После приготовления лизатов вы можете очистить ДНК менее чем за 15 минут с помощью технологии ChargeSwitch ^® . В зависимости от используемого набора образцы могут обрабатываться индивидуально или в автоматизированной системе с использованием робота для работы с жидкостью.

Предполагаемое использование наборов

Наборы крови ChargeSwitch ^® gDNA предназначены для выделения геномной ДНК из следующих количеств свежей или замороженной крови человека, обработанной антикоагулянтом EDTA или цитратом.Очищенная геномная ДНК подходит для использования в последующих приложениях, включая ПЦР, расщепление рестрикционными ферментами и Саузерн-блоттинг.

• ChargeSwitch ^® гДНК 20 мкл Наборы для крови: очищает до 600 нг геномной ДНК из 10–20 мкл крови человека.
• ChargeSwitch ^® гДНК 100 мкл Набор для крови: очищает до 3 мкг геномной ДНК из 50–100 мкл крови человека.
• ChargeSwitch ^® гДНК 1 мл Набор для крови: очищает до 20 мкг геномной ДНК из 1 мл крови человека

Важно: Геномная ДНК может быть выделена из крови, обработанной гепарином; однако ДНК не подходит для использования в последующих приложениях, таких как ПЦР, из-за присутствия гепарина.

Преимущества

Использование ChargeSwitch ^® gDNA Blood Kits для выделения геномной ДНК обеспечивает следующие преимущества:
Использует технологию на основе магнитных шариков для выделения геномной ДНК без использования опасных химикатов, центрифугирования или вакуумных коллекторов

• Быстрая и эффективная очистка геномной ДНК из образцов крови менее чем за 15 минут после подготовки образцов и лизиса
• Простой лизис с протеиназой К без необходимости механического лизиса
• Минимальное загрязнение РНК
• Очищенная геномная ДНК демонстрирует улучшенные последующие характеристики в приложениях, включая ПЦР, расщепление рестрикционными ферментами и Саузерн-блоттинг
• Включает набор, предназначенный для автоматизированной обработки большого количества образцов по 50-100 мкл в 96-луночных планшетах с использованием робота для работы с жидкостями

Технические характеристики системы

Исходный материал:	Варьируется; оптимизирован для небольших объемов образцов (т.е.е. 10-20 мкл или 50-100 мкл или 1 мл)
Объем элюирования:	100 мкл (набор 20 мкл), 150 мкл (набор 100 мкл) и 300 мкл (набор 1 мл)
Выход ДНК:	До 600 нг (набор 20 мкл), 3 мкг (набор 100 мкл) и 20 мкг (набор 1 мл)
Размер ДНК:	Зависит (зависит от качества исходного материала)

ChargeSwitch ^® Технология

Технология ChargeSwitch ® (CST ® ) — это новая технология на основе магнитных шариков, которая обеспечивает переключаемый поверхностный заряд в зависимости от pH окружающего буфера для облегчения очистки нуклеиновых кислот.В условиях низкого pH гранулы CST ® имеют положительный заряд, который связывает отрицательно заряженный остов нуклеиновой кислоты (см. Рисунок). Белки и другие загрязнители не связываются и просто смываются водным промывочным буфером. Для элюирования нуклеиновых кислот заряд на поверхности шарика нейтрализуется повышением pH до 8,5 с использованием буфера для элюирования с низким содержанием соли (см. Рисунок ниже). Очищенная ДНК мгновенно элюируется в этот буфер для элюции и готова к использованию в последующих приложениях.

ChargeSwitch ^® Характеристики магнитного шарика

Обвязка борта:	5-10 мкг геномной ДНК на мг
Размер бусины:	<1 мкм
Концентрация гранул:	25 мг / мл
Буфер хранения:	10 мМ MES, pH 5.0, 10 мМ NaCl, 0,1% Твин 20

Материалы, предоставляемые пользователем

Помимо реагентов, поставляемых с набором, перед началом работы вам необходимо иметь под рукой следующие материалы:

• Стойка для магнитной сепарации, подходящая для использования с 1,5 мл микроцентрифужными пробирками или 96-луночными планшетами
• Стерильные микроцентрифужные пробирки 1,5 мл
• 96 x 2 мл глубоколуночный планшет (при обработке образцов в 96-луночном формате; Greiner, каталожный номер.780270, Abgene, № по каталогу AB-0932 или аналог)
• 96 x 300 мкл микротитровальный планшет U-Bottomed (при обработке образцов в 96-луночном формате; Greiner, каталожный номер 650201 или аналогичный)
• Вихревой смеситель
• 20 мкл, 200 мкл и 1 мл стерильные наконечники для пипеток

MagnaRack ™ MagnaRack ™ (каталожный № CS15000) представляет собой стойку для магнитного разделения, состоящую из двух частей, для использования в протоколах с магнитными шариками, и состоит из магнитной базовой станции и съемной стойки для пробирок.Штатив для пробирок вмещает до 24 микроцентрифужных пробирок. Штатив для пробирок устанавливается на магнитную базовую станцию ​​в двух различных положениях, связывая ряд из 12 неодимовых магнитов с одним рядом из 12 трубок для простой обработки пробы «на магните» и «вне магнита».

96-луночный магнитный сепаратор

96-луночный магнитный сепаратор представляет собой стойку для магнитного разделения, которая может вместить до 96 образцов в планшете с глубокими лунками.Планшет с глубокими лунками устанавливается на магнитную базовую станцию, связывая массив из 24 неодимовых магнитов с образцами для обработки образцов «на магните» и «вне магнита» (см. Рисунки ниже).

Обращение с магнитными шариками ChargeSwitch ^®

Следуйте приведенным ниже инструкциям при обращении с магнитными шариками ChargeSwitch ^® .

• Не замораживайте бусинки, так как это их непоправимо повредит. Храните шарики при комнатной температуре.
• Всегда держите шарики в растворе. Не позволяйте им высыхать, так как это сделает их нефункциональными.
• При использовании шариков тщательно ресуспендируйте их в буфере для хранения, встряхивая перед удалением.
• Выбросьте шарики после использования. Не использовать повторно.

Буфер для элюирования
ChargeSwitch ^® Буфер для элюирования (E5; 10 мМ трис-HCl, pH 8.5) поставляется с набором для элюирования ДНК из магнитных шариков ChargeSwitch ^® . Для достижения наилучших результатов используйте буфер для элюции (E5) для элюирования ДНК. В качестве альтернативы можно использовать буфер TE с pH 8,5-9,0. Обратите внимание, что pH должен быть в пределах 8,5-9,0, иначе ДНК не будет элюироваться. Не используйте воду для элюирования.

Протокол предлагает элюировать геномную ДНК в 100 мкл (образец 10-20 мкл) или 150 мкл (образец 50-100 мкл) буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5).Вы можете изменять количество буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5), используемого для получения геномной ДНК в желаемой конечной концентрации. Для достижения наилучших результатов всегда используйте объем буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5), который равен или превышает объем магнитных шариков ChargeSwitch®, используемых в протоколе. Если объем буфера для элюирования ChargeSwitch® (E5) меньше объема используемых шариков, элюция ДНК не завершена. Возможно, вам потребуется выполнить второе элюирование, чтобы восстановить всю ДНК.

Автоматическая обработка жидкостей
Использование ChargeSwitch ^® gDNA 20 мкл набора крови было продемонстрировано на роботизированной рабочей станции Tecan Genesis® для очистки ДНК в полностью автоматизированной системе из большого количества образцов крови 10-20 мкл в 96-луночный формат. Подходят и другие роботы для работы с жидкостями при условии, что каждый из них оснащен захватным рычагом, 96-луночным магнитным сепаратором и другим дополнительным оборудованием, как описано. В этом руководстве представлены общие рекомендации и протокол, которые можно использовать для разработки сценария для вашего робота.Genesis® является зарегистрированным товарным знаком Tecan AG Group .

ChargeSwitch ^® гДНК Набор для крови

Продукт	Количество очисток	Кат.
ChargeSwitch ® gDNA 20 мкл Набор для крови	96 960	CS11010 CS11010-10
ChargeSwitch ® гДНК 100 мкл Набор для крови	50	CS11000
ChargeSwitch ® гДНК 1 мл Набор для крови	20	CS11001

Транспортировка и хранение

Все компоненты набора крови ChargeSwitch ^® gDNA поставляются при комнатной температуре.По получении храните протеиназу К при 4 ° C. Все остальные компоненты храните при комнатной температуре. При правильном хранении все компоненты имеют гарантию стабильности в течение 6 месяцев.

Содержание

Компоненты	Каталожный номер.
	CS11010	CS11000	CS11010-10
ChargeSwitch ® Буфер для лизиса (L12)	100 мл	100 мл	2 х 480 мл
ChargeSwitch ® Магнитные бусины	2 х 1 мл	2 х 1 мл	2 х 10 мл
Протеиназа К (20 мг / мл в 50 мМ трис-HCl, pH 8.5, 5 мМ CaCl 2 , 50% глицерина)	500 мкл	500 мкл	5 мл
ChargeSwitch ® Буфер для очистки (N5)	20 мл	20 мл	100 мл
ChargeSwitch Промывочный буфер ® (W12)	50 мл	100 мл	960 мл
ChargeSwitch ® Буфер для элюции (E5; 10 мМ трис-HCl, pH 8.5)	15 мл	15 мл	100 мл

ChargeSwitch ^® gDNA 1 мл Набор для крови (CS11001)

Транспортировка и хранение

Все компоненты ChargeSwitch ^® gDNA 1 мл Blood Kit поставляются при комнатной температуре. По получении храните протеиназу К при 4 ° C.Все остальные компоненты храните при комнатной температуре.
Стабильность всех компонентов при правильном хранении составляет 6 месяцев.

Содержимое

Компоненты, входящие в комплект для крови ChargeSwitch ^® gDNA 1 мл, перечислены ниже. Поставляемых реагентов достаточно для проведения 20 очисток из 1 мл проб крови.

Примечание: Некоторые реагенты в наборе могут быть превышены в необходимом количестве.

ChargeSwitch ^® гДНК Набор для крови

Компонент	Сумма
ChargeSwitch ® 10X буфер для лизиса эритроцитов (L8)	25 мл
ChargeSwitch ® Буфер для лизиса лейкоцитов (L12)	30 мл
ChargeSwitch ® Магнитные бусины	2 х 1 мл
Протеиназа К (20 мг / мл в 50 мМ трис-HCl, pH 8.5, 5 мМ CaCl 2 , 50% глицерина)	500 мкл
ChargeSwitch ® Буфер для очистки (N5)	4,5 мл
ChargeSwitch Промывочный буфер ® (W12)	100 мл
ChargeSwitch ® Буфер для элюции (E5; 10 мМ трис-HCl, pH 8.5)	10 мл

Протокол — очистка геномной ДНК из образцов крови 10-20 мкл

В этом разделе представлены рекомендации и инструкции по выделению геномной ДНК из 10-20 мкл образцов крови человека.Обратите внимание, что протокол оптимизирован для эффективной очистки ДНК из этих объемов образцов.

Исходный материал

Используйте эту процедуру для выделения геномной ДНК из образцов крови человека, которые были обработаны следующим образом:

• Объем: 10-20 мкл крови человека
• Лечение: лечение ЭДТА или цитратом
• Состояние образца: свежий или замороженный

Перед запуском

Перед началом выполните следующее:

1. Приготовьте смесь для лизиса: Для каждого образца смешайте 0.5 мл буфера для лизиса ChargeSwitch ^® (L12) и 5 ​​мкл протеиназы К для приготовления смеси для лизиса. Если вы выделяете ДНК из нескольких образцов, вы можете увеличить объем используемых реагентов и приготовить основную смесь для лизиса.
2. Перемешайте пробирку с магнитными шариками ChargeSwitch ^® на вортексе, чтобы полностью ресуспендировать и равномерно распределить шарики в буфере для хранения.
3. Приготовьте смесь для очистки: Для каждого образца смешайте 20 мкл магнитных шариков ChargeSwitch ^® (полностью ресуспендированных; см. Выше) и 100 мкл буфера для очистки ChargeSwitch ^® (N5), чтобы приготовить смесь для очистки.Если вы выделяете ДНК из нескольких образцов, вы можете увеличить объем используемых реагентов и приготовить основную смесь для очистки.

Подготовка лизата

Выполните описанную ниже процедуру, чтобы приготовить лизат из образца крови 10–20 мкл.

1. Перенесите образец крови 10–20 мкл в стерильную микроцентрифужную пробирку (или планшет с глубокими лунками 96 x 2 мл).
2. Добавьте 0,5 мл Lysis Mix (см. Выше) к образцу и аккуратно пипеткой вверх и вниз 5 раз перемешайте.

   Важно: Для перемешивания образца используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 450 мкл. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.

3. Инкубируйте образец при комнатной температуре в течение 10 минут или до тех пор, пока образец не станет прозрачным без видимых комков.
4. Перейти к связыванию ДНК.

Связывание ДНК

Следуйте приведенной ниже процедуре, чтобы привязать ДНК к магнитным шарикам ChargeSwitch ^® .

1. Осторожно пипетируйте вверх и вниз очищающую смесь, содержащую магнитные шарики ChargeSwitch ^® , чтобы полностью ресуспендировать шарики.
2. Добавьте 120 мкл очищающей смеси ChargeSwitch ^® к расщепленному образцу (из шага 3 выше) и осторожно пипетируйте 5 раз для перемешивания.
   
   Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 550 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.
3. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты, чтобы ДНК могла связываться с магнитными шариками ChargeSwitch ^® .
4. Поместите образец в MagnaRack ™ (или 96-луночный магнитный сепаратор, если используется 96-луночный планшет с глубокими лунками) на 1 минуту или до тех пор, пока шарики не сформируют плотный осадок.
5. Не вынимая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы (см. Рисунок).

6. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™. В пробирке не должно быть супернатанта.
7. Добавьте 500 мкл буфера для лизиса ChargeSwitch ^® (L12; без протеиназы К) в пробирку и осторожно пипеткой вверх и вниз 3 раза перемешайте. Используйте наконечник для пипетки объемом 1 мл, рассчитанный на 450 мкл.
8. Добавьте 50 мкл буфера для очистки ChargeSwitch ^® (N5) и аккуратно пипеткой вверх и вниз 3 раза перемешайте. Используйте наконечник пипетки на 1 мл, рассчитанный на 500 мкл.
9. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты.
10. Поместите образец в MagnaRack ™ (или 96-луночный магнитный сепаратор, если необходимо) на 1 минуту или до тех пор, пока шарики не сформируют плотный осадок.
11. Не вынимая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.
12. Немедленно переходите к разделу «Промывание ДНК» ниже.

Промывка ДНК

1. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™ (шаг 11, выше). В пробирке не должно быть супернатанта.
2. Добавьте 500 мкл промывочного буфера ChargeSwitch ^® (W12) к образцу и осторожно пипетируйте дважды вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.

   Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.

3. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.
4. Не вынимая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.
5. Перейти к выделению ДНК.

Выделение ДНК

1. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™ (шаг 4, выше).В пробирке не должно быть супернатанта.
2. Добавьте 100 мкл буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5) (или буфера TE, pH 8,5) к образцу и осторожно пипетируйте 10 раз вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.

   Важно: Не используйте воду для элюирования. ДНК не элюируется из-за плохой буферной способности воды.

3. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты.
4. Поместите образец в MagnaRack ™ на 3 минуты или до тех пор, пока шарики не образуют плотный осадок.
5. Не вынимая пробирку из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант, содержащий ДНК, в стерильную микроцентрифужную пробирку (или 96 x 300 мкл микротитровального планшета с U-образным дном). Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.
6. Выбросьте использованные магнитные шарики. Не используйте бусинки повторно.

Хранение ДНК

Храните очищенную ДНК при -20 ° C или сразу используйте для последующего анализа.Пустота многократно замораживает и размораживает ДНК.

Количественное определение выхода ДНК

Для количественного определения выхода вашей ДНК мы рекомендуем использовать набор для количественного определения дцДНК Quant-iT ™ PicoGreen ^® (каталожный номер P7589). Этот набор содержит реагенты, необходимые для чувствительного и точного определения на основе флуоресценции всего 25 пг / мл дцДНК с использованием реагента для количественного определения дцДНК Quant-iT ™ PicoGreen ^® .

Протокол — очистка геномной ДНК из образцов крови 50-100 мкл

В этом разделе представлены рекомендации и инструкции по выделению геномной ДНК из 50–100 мкл образцов крови человека.Обратите внимание, что протокол оптимизирован для эффективной очистки ДНК из этих объемов образцов.

Исходный материал Используйте эту процедуру для выделения геномной ДНК из образцов крови человека, которые были обработаны следующим образом:

• Объем: 50-100 мкл крови человека
• Лечение: лечение ЭДТА или цитратом
• Состояние образца: свежий или замороженный

Перед запуском Перед началом выполните следующее:

1. Приготовьте смесь для лизиса: Для каждого образца смешайте 1 мл буфера для лизиса ChargeSwitch ^® (L12) и 10 мкл протеиназы K, чтобы приготовить смесь для лизиса.Если вы выделяете ДНК из нескольких образцов, вы можете увеличить объем используемых реагентов и приготовить основную смесь для лизиса.


2. Перемешайте пробирку с магнитными шариками ChargeSwitch ^® на вортексе, чтобы полностью ресуспендировать и равномерно распределить шарики в буфере для хранения.


3. Приготовьте смесь для очистки: Для каждого образца смешайте 40 мкл магнитных шариков ChargeSwitch ^® (полностью ресуспендированных; см. Выше) и 200 мкл ДНК, выделенной из нескольких образцов, вы можете увеличить объем использованные реагенты и приготовьте основную смесь для очистки.

Подготовка лизата Выполните описанную ниже процедуру, чтобы приготовить лизат из 50–100 мкл образца крови.

1. Перенесите образец крови 50–100 мкл в стерильную микроцентрифужную пробирку или планшет с глубокими лунками 96 x 2 мл.


2. Добавьте 1 мл смеси для лизиса (см. Выше) к образцу и осторожно пипеткой вверх и вниз 5 раз перемешайте.

Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.
3. Инкубируйте образец при комнатной температуре в течение 10 минут или до тех пор, пока образец не станет прозрачным без видимых комков.


4. Перейти к связыванию ДНК.

Связывание ДНК Следуйте приведенной ниже процедуре, чтобы привязать ДНК к ChargeSwitch ^® Магнитные бусины.

1. Осторожно пипетируйте вверх и вниз очищающую смесь, содержащую магнитные шарики ChargeSwitch ^® , чтобы полностью ресуспендировать шарики.


2. Добавьте 240 мкл очищающей смеси ChargeSwitch ^® к расщепленному образцу (из шага 3, выше) и осторожно пипетируйте 5 раз, чтобы перемешать.

   Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.



3. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты, чтобы позволить ДНК связаться с магнитными шариками ChargeSwitch ^® .


4. Поместите образец в MagnaRack ™ (или 96-луночный магнитный сепаратор) на 1 минуту или до тех пор, пока шарики не сформируют плотный осадок.


5. Не извлекая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте.Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы (см. Рисунок).


6. Немедленно приступите к отмывке ДНК.

Промывка ДНК

1. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™ (шаг 5, выше). В пробирке не должно быть супернатанта.


2. Добавьте 1 мл промывочного буфера ChargeSwitch ^® (W12) к образцу и осторожно пипетируйте дважды вверх и вниз для ресуспендирования магнитных шариков.Для перемешивания используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл.


3. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.


4. Не извлекая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


5. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™.В пробирке не должно быть супернатанта.


6. Добавьте 1 мл буфера для лизиса ChargeSwitch ^® (L12; без протеиназы К) в пробирку и аккуратно пипеткой вверх и вниз 3 раза перемешайте. Для перемешивания используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл.


7. Добавьте 50 мкл буфера для очистки ChargeSwitch ^® (N5) и осторожно пипеткой вверх и вниз 3 раза перемешайте. Для перемешивания используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл.


8. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты.


9. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.


10. Не извлекая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


11. Удалите трубку с гранулированными магнитными шариками из MagnaRack ™.


12. Добавьте 1 мл промывочного буфера ChargeSwitch ^® (W12) в пробирку и осторожно пипетируйте дважды вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.Для перемешивания используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл.


13. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.


14. Не извлекая образец из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


15. Перейти к выделению ДНК ниже.

Выделение ДНК

1. Удалите образец, содержащий гранулированные магнитные шарики, из MagnaRack ™ (шаг 14, выше).В пробирке не должно быть супернатанта.


2. Добавьте 150 мкл буфера для элюции ChargeSwitch ^® (E5) (или буфера TE, pH 8,5) в пробирку и осторожно пипетируйте 10 раз вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.

   Важно: Не используйте воду для элюирования. ДНК не элюируется из-за плохой буферной способности воды.



3. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты.


4. Поместите образец в MagnaRack ™ на 3 минуты или до тех пор, пока шарики не образуют плотный осадок.


5. Не вынимая пробирку из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант, содержащий ДНК, в стерильную микроцентрифужную пробирку (или 96 x 300 мкл микротитровального планшета с U-образным дном). Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


6. Выбросьте использованные магнитные шарики. Не используйте бусинки повторно.

Хранение ДНК Храните очищенную ДНК при -20 ° C или сразу используйте для последующего анализа.Избегайте многократного замораживания и размораживания ДНК.

Количественное определение выхода ДНК Для количественного определения выхода вашей ДНК используйте Quant-iT ™ PicoGreen Набор для количественного определения дцДНК ^® (Каталожный номер P7589).

Протокол — Очистка геномной ДНК из 1 мл крови

В этом разделе представлены рекомендации и инструкции по выделению геномной ДНК из 1 мл образцов крови человека.

Исходный материал

Используйте эту процедуру для выделения геномной ДНК из:

• 1 мл обработанной ЭДТА или цитратом, свежей или замороженной, человеческой крови


• Бледное покрытие, эквивалентное 1 мл лейкоцитов

Подготовка 1X буфера для лизиса эритроцитов

При первом использовании набора подготовьте 1X буфер для лизиса RBC:

• Смешайте содержимое 10-кратного буфера для лизиса эритроцитов ChargeSwitch ^® (L8; 25 мл) с 225 мл стерильной воды для приготовления 1-кратного буфера для лизиса эритроцитов (общий объем = 250 мл).
• Используйте 1X RBC Lysis Buffer (см. «Подготовка лизата») или храните при комнатной температуре.

Подготовка лизата

Чтобы приготовить лизат из пробы крови объемом 1 мл, выполните описанную ниже процедуру.

1. В центрифужную пробирку на 15 мл добавьте 1 мл образца крови и 10 мл 1X буфера для лизиса эритроцитов.


2. Перемешайте, перевернув 5 раз, затем инкубируйте 5 минут при комнатной температуре, чтобы лизировать эритроциты.


3. Центрифугируйте образец в течение 5 минут при 2000 x g. Осторожно слейте супернатант, оставив осадок белых кровяных телец (виден на дне пробирки).


4. Добавьте 1 мл промывочного буфера ChargeSwitch ^® (W12), распределив жидкость по стенкам пробирки. Будьте осторожны, чтобы не повредить осадок белых кровяных телец.

Примечание: Если осадок вылетает из нижней части пробирки, центрифугируйте образец в течение 1 минуты при 2000 x g.

5. Осторожно слейте супернатант, содержащий гем, оставив осадок лейкоцитов.


6. Встряхните флакон ChargeSwitch ^® WBC Lysis Buffer (L12), чтобы перемешать (раствор будет мутным). Добавьте 0,5 мл к образцу и перемешайте встряхиванием в течение 10 секунд (рекомендуется) или пипетированием вверх и вниз 10 раз.


7. Перенесите всю жидкость (и любые комочки) в стерильную микроцентрифужную пробирку, содержащую 1 мл буфера для лизиса лейкоцитов ChargeSwitch ^® (L12) и 20 мкл протеиназы К.


8. Дважды пипетируйте вверх и вниз для перемешивания.


9. Инкубируйте образец в течение 10-30 минут при 60 ° C, время от времени перемешивая (пипетированием вверх и вниз, встряхиванием или встряхиванием), чтобы лизировать лейкоциты. Не продолжайте, пока образец не станет прозрачным без видимых комков.


10. Пипеткой вверх и вниз 10 раз тщательно перемешать образец.

    Примечание: Используйте наконечник пипетки на 1 мл и позвольте как можно большему количеству пробы войти в наконечник перед тем, как отсосать жидкость.



11. Перейти к связыванию ДНК.

Связывание ДНК

Следуйте приведенной ниже процедуре, чтобы привязать ДНК к магнитным шарикам ChargeSwitch ^® .

1. Перемешайте пробирку с магнитными шариками ChargeSwitch ^® на вортексе, чтобы полностью ресуспендировать и равномерно распределить шарики в буфере для хранения. Убедитесь, что весь раствор, содержащий шарики, находится на дне пробирки.


2. Добавьте 100 мкл магнитных шариков ChargeSwitch ^® к расщепленному образцу (из шага 10, выше) и осторожно дважды пипеткой вверх и вниз для перемешивания.


3. Добавьте 100 мкл буфера для очистки ChargeSwitch ^® (N5) к образцу и осторожно пипетируйте 5 раз, чтобы перемешать.
   
   Примечание: Добавление буфера для очистки ChargeSwitch ^® (N5) снижает pH образца и оптимизирует условия связывания.


4. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты, чтобы позволить ДНК связаться с магнитными шариками ChargeSwitch ^® .


5. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.


6. Не вынимая пробирку из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте.


7. Немедленно приступите к отмывке ДНК.

Промывка ДНК

1. Удалите трубку с гранулированными магнитными шариками из MagnaRack ™ (шаг 6, выше). В пробирке не должно быть супернатанта.


2. Добавьте 1 мл промывочного буфера ChargeSwitch ^® (W12) в пробирку и аккуратно пипеткой вверх и вниз 3 раза, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.

   Важно: Используйте наконечник пипетки на 1 мл, установленный на 900 мкл, для перемешивания образца. Убедитесь, что наконечник погружен в воду, и аккуратно поднимайте и опускайте пипетку, чтобы избежать образования пузырьков.



3. Поместите образец в MagnaRack ™ на 1 минуту или пока шарики не сформируют плотный осадок.


4. Не вынимая пробирку из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант и выбросьте. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.


5. Повторите шаги 1-4.


6. Перейти к выделению ДНК.

Выделение ДНК

1. Удалите трубку с гранулированными магнитными шариками из MagnaRack ™ (шаг 5, выше). В пробирке не должно быть супернатанта.


2. Добавьте 300 мкл элюирующего буфера ChargeSwitch ^® (E5) (или TE Buffer, pH 8,5) в пробирку и осторожно пипетируйте 10 раз вверх и вниз, чтобы ресуспендировать магнитные шарики.

   I Важно: Не используйте воду для элюирования. ДНК не элюируется из-за плохой буферной способности воды.



3. Инкубируйте при комнатной температуре 5 минут.

   Наконечник: Для максимального выхода перемешайте суспензию шариков (осторожно пипетируя вверх и вниз) в середине инкубации. Инкубация образца при 60 ° C также может повысить урожайность.



4. Поместите образец в MagnaRack ™ на 5 минут или пока шарики не сформируют плотный осадок.


5. Не вынимая пробирку из MagnaRack ™, осторожно удалите супернатант, содержащий ДНК, в стерильную микроцентрифужную пробирку. Следите за тем, чтобы не повредить гранулу с шариками, наклоняя пипетку так, чтобы кончик был направлен в сторону от гранулы.

   Примечание: Если элюат, содержащий ДНК, обесцвечивается, повторите шаги 4-5.



6. Выбросьте использованные магнитные шарики. Не используйте бусинки повторно.

Хранение ДНК

• Храните очищенную ДНК при -20 ° C или сразу используйте для желаемого последующего применения.
• Избегайте многократного замораживания и размораживания ДНК. Очищенную ДНК храните при 4 ° C для краткосрочного использования или аликвотируйте ДНК и храните при -20 ° C для длительного хранения.

Количественное определение выхода ДНК

Вы можете оценить выход очищенной геномной ДНК, проверив УФ-поглощение при 260 нм или используя один из наборов для анализа ДНК Quant-iT ™.

УФ-абсорбция

1. Измерьте A260 раствора с помощью спектрофотометра с нулевым уровнем 10 мМ трис-HCl, pH 8.5.

2. Рассчитайте количество ДНК по формуле:

ДНК (мкг) = A260 x 50 мкг / (A260 x 1 мл) x коэффициент разбавления x общий объем образца (мл)
Для ДНК, A260 = 1 для раствора 50 мкг / мл, измеренного в кювете с длиной оптического пути 1 см

Наборы для анализа ДНК Quant-iT ™

Наборы для анализа ДНК Quant-iT ™ обеспечивают быстрое, чувствительное, и точный метод количественного определения дцДНК с минимальным вмешательством со стороны РНК, белка, оцДНК (праймеров) или других распространенных загрязнителей, влияющих на поглощение УФ-излучения.Каждый набор содержит современный реагент для количественного анализа, предварительно разведенные стандарты для стандартной кривой и предварительно приготовленный буфер для количественного анализа ДНК на основе флуоресценции.

Обработка большого количества образцов в 96-луночном формате

В этом разделе представлена ​​общая информация по использованию набора для крови ChargeSwitch ^® gDNA 20 мкл (номер по каталогу.CS11010-10) для обработки большого количества образцов в 96-луночном формате с помощью автоматизированного робота для обработки жидкостей.

Требования к оборудованию

Химический состав ChargeSwitch ^® идеально подходит для очистки ДНК с использованием открытых роботов для работы с жидкостью, избегая необходимости в стадиях центрифугирования или использовании этанола или хаотропных солей. Вам потребуется следующее оборудование для выполнения автоматической обработки образцов крови 10-20 мкл с помощью ChargeSwitch ^® gDNA 20 мкл Blood Kit:

• Любая роботизированная рабочая станция для работы с жидкостями с захватным рычагом
• Соответствующие наконечники для дозирования и аспирации жидкости (факторы, которые следует учитывать, см. Ниже)
• 96-луночный магнитный сепаратор
• шейкер
• 96 x 2 мл планшеты с глубокими лунками (Greiner, Кат.780270 или Abgene, № по каталогу AB-0932)
• 96 x 300 мкл микротитровальный планшет U-Bottomed (Greiner, каталожный номер 650201)

Пример настройки колоды.

Выбор наконечника

Вы можете использовать любые наконечники по выбору для дозирования и аспирации жидкости во время процедуры очистки. При выборе подходящей насадки учитывайте следующие факторы.

• Фиксированные и одноразовые наконечники
• Размер наконечника vs.размер головы
• Проводящие или непроводящие
• Стерильно или нестерильно
• С фильтром или без фильтра

Настройка деки

После того, как у вас будет необходимое оборудование, вам нужно будет соответствующим образом настроить деку вашего робота для обработки жидкостей для обработки образцов. Вы можете использовать любую подходящую конфигурацию по вашему выбору. Пример приведен ниже.

Расположение	Содержимое желоба	Пластина
1		96-луночный лоток для проб
2	Смесь для очистки ( и.е. ChargeSwitch ® Буфер для очистки (N5) + ChargeSwitch ® Магнитные шарики)
3	Смесь для лизиса ( то есть ChargeSwitch ® буфер для лизиса (L12) + протеиназа K)
4	ChargeSwitch ® Буфер для очистки (N5)
5	ChargeSwitch ® Буфер для лизиса (L12)
6	ChargeSwitch Промывочный буфер ® (W12)
7	ChargeSwitch ® Буфер для элюции (E5)
8	Трата
9		96-луночный магнитный сепаратор
10		Шейкер
11		96-луночный лоток для образцов
12	ChargeSwitch ® Буфер для лизиса (L12)
13		96-луночный микротитровальный планшет с U-образным дном (для окончательной элюции)

Параметры первичной обработки жидкости

В таблице ниже перечислены основные параметры обработки жидкости, необходимые для выделения ДНК с использованием автоматизированного протокола.Используйте предоставленные параметры и инструкции.

Параметр	Цель	Руководящие принципы
[Подготовка магнитных шариков]	Для ресуспендирования шариков перед смешиванием с раствором	Требуется только один раз Бусины остаются в подвешенном состоянии до 45 минут
[Смешивание №1]	Используется для смешивания гранул или гранул / гранул ДНК с буфером	Аспирация / дозирование 400-500 мкл Положение аспирации / дозирования зафиксировано на 1-2 мм выше дна лунки Используйте наконечники / настройку объема при объеме 80 мкл
[Выдача жидкости]	Нормальные параметры жидкости для добавления реагента в каждую лунку	Аспирируйте / распределите по 300-400 мкл. Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт